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细菌纯种分离与培养 　　摘 要：以污水处理厂的剩余活性污泥作为实验材料，在环境专业本科生中开展细菌的纯种分离与培养实验，巩固了学生专业基础理论知识，锻炼了学生实验操作技能，激发了学生学习的热情，促进了学生创新能力的培养。 　　关键词：细菌；分离；培养 　　The isolation and culture of bacteria 　　Zhang Xian 　　Tongji University， Shanghai， 200092， China 　　Abstract： The experiment of isolation and culture of bacteria was carried out among environmental undergraduates by using the activated sludge sampled from wastewater treatments. The students microbial basis of theoretical knowledge was consolidated， their experimental skills were enhanced， their enthusiasm in learning was stimulated and their creative ability was promoted. 　　Key words： bacteria； isolation； culture 　　在我们生活的环境中，微生物无处不在。它们个体极其微小，用肉眼难以观察，种类繁多，数量巨大，在人们生活中发挥着重要的作用。微生物可以用于生产抗生素，治疗疾病；也可用于发酵面包、乳酪等食品；还可以用于城市污水处理厂污水的生物处理等。基于微生物的重要作用，有必要对微生物教学与科研进行深入研究，探索其未知规律，以便于人们能够更好地对其加以应用。 　　通常情况下，微生物是以群体的方式“杂居”在环境中。为了方便进行研究与应用，一般需要先把目标微生物从微生物群体中分离出来，进行纯化，得到其纯种。在环境微生物学实验课程中，细菌的纯种分离与培养实验，其目的是教会学生将细菌从微生物群体中分离纯化出来，最终得到细菌纯种[1，2]。 　　1 细菌纯种分离方法 　　在微生物实验中，一般通过单菌落分离的方法获得细菌纯种。所谓单菌落分离，就是让微生物群体在培养基上生长，形成单菌落，然后将目标细菌的单菌落纯化，最终得到目标细菌纯种。由于分离专性厌氧细菌需要专门的厌氧操作箱或者其他类似的仪器设备，其数量有限，短时间内无法满足实验课的需求。因此，在环境专业本科生的实验课中，通常学生分离的是好氧细菌或兼性好氧细菌。针对这两大类细菌，可以通过平板划线法、平板表面涂布法或浇注平板法获得细菌单菌落。 　　2 实验材料 　　细菌的纯种分离实验以环境样品作为实验材料，这些环境样品包括从上海曲阳污水处理厂二沉池取来的剩余活性污泥、崇明岛滩涂的土壤以及校园河水等。污水处理厂生化反应池中利用微生物组成的活性污泥具有处理污水的功能，而从崇明岛采集的土壤样品和从校园采集的河水水样都具有一定的代表意义。以这些环境样品作为实验材料，对其进行细菌纯种的分离、纯化，将实验教学与环境问题有机结合，有助于加深环境专业本科生对污水生物处理及土壤、河水微生物的认识与理解，拓宽学生的专业视野，激发学生的好奇心，促进学生创新思维的培养[2]。 　　3 细菌的纯种分离与培养实验 　　平板划线法、平板表面涂布法和浇注平板法都是以培养皿作为培养微生物的容器，将适于微生物生长的培养基灭菌、倒平板、冷却凝固后，通过将样品在培养基上划线、涂布样品稀释液或者直接将样品稀释液和培养基混合均匀的方式，使样品中微生物的浓度得到稀释，然后在培养基上生长形成单菌落。虽然这3种实验方法的具体操作有所不同，但是其本质都是将样品进行稀释，使样品中的细菌最终在培养基上形成单菌落，从而得到纯菌。本实验主要学习用浇注平板法分离纯化剩余活性污泥中的细菌[3]。 　　3.1 实验准备工作 　　实验开始以前，需要做好实验准备工作。由于实验中学生需要用培养皿、培养基并稀释环境样品，所以准备工作中最重要的是培养皿以及稀释环境样品所用的物品的准备，此外还有培养基的配制。 　　根据实验需要，每组学生准备若干套培养皿。每套培养皿包括一个培养皿盖和一个培养皿底，这些培养皿都是事先清洗干净并在室温自然晾干的。学生将若干套培养皿按一定的排列顺序放入专门的培养皿罐中，然后放入电热干燥箱中，160 ℃干热灭菌2小时后取出，放在室温下冷却待用。此外，还需要准备1 mL和10 mL的移液管，放入专门的移液管筒中，和培养皿罐一样进行干热灭菌。 　　由于剩余活性污