医学毕业论文--养血清宫方干预实验性km小鼠月经模型激素水平及子宫形态研究.doc

养血清宫方干预实验性km小鼠月经模型激素水平及子宫形态研究 作者：赵存彦丁芳王亮李春香陈进成孙琦 【摘要】目的揭示养血清宫方干预实验性小鼠月经模型激素水平及子宫形态的作用。方法建立km小鼠月经模型，通过灌胃给药养血清宫方进行干预，观察小鼠血清E2、P激素水平。结果[1]激素水平：给药2-6h血清E2处于低谷，6h之后有大幅度的增加，较模型组显著（P＜0.05）。给药4h-8h血清P激素处于低谷后逐渐回升，与模型组比有统计学意义（P＜0.05)。⑵子宫形态：给药8h-12h实验侧子宫角出现明显充血现象，颜色呈暗红色，对照侧未充血肿大，呈浅粉色。结论养血清宫方具有提高E2、P激素水平，促进子宫内膜脱落作用。 【关键词】小鼠月经模型中药养血清宫方雌孕激素孕激素 月经是女子的生理现象，中医认为其产生是脏腑经络气血作用于胞宫的生理变化，以肾气、天癸为主，现代医学认为月经周期的产生是下丘脑-垂体-卵巢的功能调节，随着雌激素、孕激素的不同变化出现月经。目前，常见的女性疾病，如月经不调等，已成为困扰当今女性的问题，均与其激素水平有关[1]。临床治疗中，多采用长期口服激素替代疗法，安全性差，效果不佳[2-5]；在中药调理月经方面仅限于临床报道，缺乏实验研究的验证，以至于很多人对中药复方干预、调理月经的机理产生质疑。本实验针对中药复方是否能通过改善激素水平干预月经展开了实验研究，复制小鼠月经模型，同时根据中医理论，于月经周期的末期，给予养血清宫方进行干预，是否能够干预激素水平，调理月经进行实验。 1材料 1.1实验动物 雌性未孕昆明小鼠80只（清洁级，购自河北医科大学动物实验中心，合格证号：SCXK（冀）2008-1-008）7～8周龄，30g±2g。 1.2试剂与药材 雌二醇(AifaAesarInc.，Heysham公司)，孕酮(Sigma一Aldrich公司)，花生油（鲁花5S一级压榨花生油）黄芪、当归、益母草、泽兰、桃仁、川芎、生蒲黄、五灵脂、香附、玫瑰花、炮姜、艾叶等，均购自石家庄乐仁堂药房，经生药教研室鉴定符合2005版药典规定。 1.3仪器 硅胶管(508-008，DowCorning公司)，酒精灯，镊子，50ml离心管，一次性滤器，10ml注射器，1.5-2ml离心管，大中小枪尖等。 2方法 2.1试剂的制备 雌二醇(E2)配置成150ng/100ul、7.5ng/100ul工作液。孕酮(P4)配置成75ng/100ul工作液。孕酮硅胶管将孕酮粉末填入硅胶管内，将两端封住。 2.2药液的制备 养血清宫方由黄芪、当归、益母草、泽兰、桃仁、川芎、生蒲黄、五灵脂、香附、玫瑰花、炮姜、艾叶等组成，采取传统煎药方法，分别煎煮2次，每次25分钟，合并两次药液，浓缩至1g/ml，4℃冰箱保存备用。 2.3动物模型分组给药 将小鼠正常饲养一周后，在乙醚麻醉的情况下，切除双侧卵巢，恢复1周后，随机分为模型组，养血清宫方组。各组去势小鼠分别在第1，2，3天上午9：30皮下注射150ng雌二醇；在第7天，皮下注射75ng孕酮和7.5ng雌二醇，同时将孕酮硅胶皮埋管置于小鼠背部皮下；在第8，9天上午9：30皮下注射7.5ng雌二醇；养血清宫组在第7天始灌胃给药，温服，每日1次。在第9天上午11：30在小鼠子宫（单侧）注射20ul无菌花生油48h。 2.4取材 实验第11天11：30取出皮埋管,以12:30作为0h，在0h,2h,4h,6h,8h,10h,12h,16h，8个时间点，分别将小鼠摘眼球取血，收集子宫，观察子宫变化情况，并检测血清中孕酮和雌二醇含量。 3统计学处理 结果用±s表示。所有数据用统计软件SPSS16.0进行处理，并用单因素方差分析进行检验。以P＜0.05为显著性差异。 4结果 4.1养血清宫方对小鼠子宫形态变化的影响模型组小鼠实验侧子宫角在8h-16h出现充血现象,颜色暗红；对照侧充血肿大不明显，呈浅粉色。养血清宫组给药侧子宫角于8h-12h出现明显充血现象，颜色暗红，但在16h充血减 4.2养血清宫方对小鼠血清E2含量的影响见表1。 5讨论 5.1对小鼠血清激素水平的影响 孕酮的撤退和花生油的刺激可以导致子宫内膜蜕膜化，雌二醇含量的升高可促进子宫内膜脱落，形成月经。由此可知月经的形成与雌孕激素相互作用有关。本实验结果显示：实验小鼠血清孕酮水平两头高中间低。即在给药后4h-8h孕酮处于低谷，10h后大福回升，与模型组相比有统计学意义（P＜0.05）。实验小鼠血清雌二醇水平先低后高。即给药后2-6h处于低谷，8h后大幅度增加，较模型组有显著性差异（P＜0.05）。由此可见，养血清宫方组小鼠E2、P激素水平与模型组相比不仅有显著差异，且低水平维持时间较短，月经后期回升较快，提示该方具