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耕种模式对三江平原黑土细菌多样性影响 　　摘要：本试验使用Illumina MiSeq测序平台，选取我国东北三江平原地区的大田黑土、菜园黑土和森林黑土3种样本，对不同耕种黑土表层细菌群落结构进行分析。结果显示：大田土、菜园土和森林土的微生物群落存在明显差异。大田土的群落丰富度明显低于菜园土和森林土，后两者相似度较高。大田土的OTU数比菜园土和森林土分别少13.3%和7.6%。菜园土的微生物群落组成种类最为丰富，森林土中硝化螺旋菌门含量最高，大田土微生物群落含有的外源性物质降解相关基因相对丰度较高。可见，三江平原大田黑土的退化和土壤微生物群落的改变有关，调节土壤微生物群落结构将有助于东北大田黑土的修复。 　　关键词：细菌群落多样性；高通量测序；黑土地；耕种模式 　　中图分类号：S154.36文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）07-0076-06 　　我国东北地区的黑土为世界上四大黑土地之一，是我国主要土壤类型之一，其土质肥沃、质地疏松，是重要的商品粮生产基地[1，2]，总面积达1.0×107 hm2[3]，由黑龙江、松花江和乌苏里江冲积而成的三江平原是其中的重要组成部分。但由于我国长期实行的农业耕作方式产生的一些弊端，尤其是长期单独施用化肥，致使黑土肥力显著下降，出现土壤板结、酸化、可耕性变差等土壤退化问题[4，5]，亟待解决。 　　土壤含有大量的微生物，包括细菌、放线菌、真菌、原生动物和显微藻类等，其中细菌含量最高[6]，在黑土土壤中约占微生物总数的80%以上[7]。土壤微生物群落是土壤生态系统的重要组成部分，在土壤有机物质转化和养分循环等多种生态过程中起着积极作用[8]。土壤微生物群落对生存环境的变化十分敏感，可以随着环境变化做出响应[9]，是衡量土壤生物学活性以及生产力的一项重要指标[3]。土壤微生物群落多样性即为土壤微生物活性指标中最重要的因素[10]，在一定程度上反映土壤性能。有研究表明，长期不同的人为施肥制度对土壤的微生物数量和群落结构影响显著[11]，如：长期施入氮肥会降低土壤微生物活性；而植物残体和粪肥等有机肥料的施入可维持土壤肥力及微生物系统稳定，进而可改善土壤微生态环境或提高土壤微生物群落功能多样性[4，12，13]。对黑土土壤微生物群落功能多样性进行研究，可分析出微生物群落的功能，找出土壤肥力和土壤微生物之间的关系，对黑土土壤肥力及健康评价具有重要意义[2]，也可对退化黑土土壤进行有效的微生物修复提供重要参考。近年来，对土壤微生物的群落结构与组成的研究备受关注。 　　本试验研究了长期施用化肥并种植经济作物的大田表层黑土、长期施用农家肥并种植蔬菜的菜园表层黑土以及森林表层黑土的细菌群落多样性，分析长期不同耕种方式及人为干扰对三江平原黑土地表层细菌群落多样性的影响，为三江平原大田黑土的微生物修复策略找到合适的微生物菌群、实现土地可持续利用提供科学依据。 　　1材料与方法 　　1.1取样 　　取样地点分布在黑龙江省鹤岗市萝北县军川农场（隶属北大荒集团），地处三江平原，介于东经131°02′～131°30′、北纬47°20′～47°40′之间。选取样本分为三类：森林土、菜园土以及大田土，分别编号为Ne1、Ne3和Ne4。森林土为东北寒温带原始森林地表层以下10～15 cm的黑土，菜园土为20世纪70年代开垦以来长期混种多种蔬菜和不定期施用不同种类农家肥的地表层以下10～15 cm的黑土，大田土为开垦以来长期种植大豆和玉米两种作物并施用化肥的地表层以下10～15 cm的黑土。取样时间为2015年8月1日。土壤取出后立即于-20℃冻存，一个月内完成分析工作。 　　1.2样品处理 　　每种样本选择两个生物学重复，用美国OMEGA公司的E.Z.N.A. Soil DNA Kit提取土壤总DNA，检测合格后，采用Illumina MiSeq测序平台，委托上海派森诺生物科技股份有限公司进行土壤细菌多样性检测。 　　2结果与分析 　　2.1样本测序数量的可信度 　　本试验中测序分析选择的测序数量为40 000条左右，从图1稀释曲线可以看出，所选测序斜率明显变小，说明测定的各样本能够反映真实物种的丰富度，数据分析和处理合理、可信度高。 　　2.2Alpha多样性分析 　　一个特定区域或生态系统内的微生物多样性常用Alpha 多样性来表示，可反映出丰富度和均匀度的综合指标。群落丰富度的指数Chao指数和ACE指数均和样本群落丰富度呈正比。群落多样性的指数Shannon指数和Simpson指数，分别和群落多样性呈正比和反比。三种样本在97%相似水平上的Alpha 多样性分析结果见表1。样本Ne3的Chao 指数和 ACE 指数最大，说明样本中含有的OTU数多，即群落丰富度最高；其次