芍药汤对胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜核因子―κB DNA结合活性影响.docVIP

芍药汤对胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜核因子―κB DNA结合活性影响 　　[摘要] 目的 研究芍药汤对胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB（NF-κB）DNA结合活性的影响。 方法 将40只SD大鼠随机分为4组：正常组，模型组，芍药汤组，柳氮磺胺吡啶（SASP）组。制备胃肠湿热型模型，然后采用三硝基苯磺酸（TNBS）制备灌肠法溃疡性结肠炎模型，灌胃治疗10 d后处死大鼠，取新鲜结肠黏膜标本提取核蛋白，利用以酶联免疫吸附测定（ELISA）为基础的Trans AMTM NF-κB P65试剂盒检测各组NF-κB相对活性。 结果 与正常组比较[（0.263±0.041）]，模型组大鼠NF-κB相对活性明显增高[（0.467±0.083）]，差异有高度统计学意义（P 0.01）；与模型组比较，芍药汤组大鼠结肠黏膜NF-κB相对活性明显降低[（0.271±0.089）]，差异有高度统计学意义（P 0.01）。 结论 芍药汤能明显降低胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型结肠黏膜NF-κB相对活性，可能是其治溃疡性结肠炎作用的机制之一。 　　[关键词] 芍药汤；胃肠湿热；溃疡性结肠炎；核因子-κB 　　[中图分类号] R574.62；R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）01（c）-0004-03 　　溃疡性结肠炎（UC）的病因和发病机制迄今尚未明确，其中免疫因素在此病中所起的作用越来越受重视，研究已深入到细胞分子水平，特别是近年来研究发现核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）调控着UC患者中细胞因子和细胞黏附分子（cell adhesionmolecules，CAM）的释放，从而参与了UC肠道的炎症和免疫反应。芍药汤出自《素问病机气宜保命集》，具有清热燥湿、调气和血的功效，根据多年的临床研究，对于胃肠湿热型UC，具有良好的疗效，为求进一步明确芍药汤干预UC调节作用机制，本实验通过检测NF-κB的DNA结合活性，从基因水平探讨芍药汤干预UC的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　清洁级SD大鼠40只，体重180～220 g，购自湖南中医药大学动物实验室[合格证号：SCXK（湘）2011～0003]，动物适应性饲养1周。 　　1.2 实验器材 　　核蛋白提取试剂盒（武汉博士德生物公司）；BCA-100蛋白质定量测定试剂盒（西安晶彩生物科技有限公司）；Tarns AMTM NF-κB酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（上海齐一生物物技有限公司）；ZFMQ050PE型超纯水器（上海摩勒科学仪器有限公司）；3K-30Z型高速冷冻离心机（德国Sigma公司）。 　　1.3 实验阳性对照药物与试剂 　　柳氮磺胺吡啶（SASP）（上海福达制药有限公司，批号：201310001，每片0.25 g），三硝基苯磺酸（TNBS）（Sigma公司），药物用蒸馏水配成50 g/L。 　　1.4 实验用药的制备 　　芍药汤超微颗粒由芍药、当归、黄连、槟榔、木香、黄芩、大黄、肉桂、甘草9味药组成。组方超微颗粒由湖南春光九汇现代中药有限公司提供，然后在湖南中医药大学附属第二医院制剂科，将药物用蒸馏水制成含生药1.32 g/mL水剂。 　　1.5 实验方法 　　1.5.1 造模及分组 将40只大鼠随机分为4组，每组各10只，正常组、模型组、芍药汤组、SASP组。除正常组外，其余3组首先参考文献[1-2]复制胃肠湿热模型：以高脂高糖饮食饲养大鼠，即在普通饲料喂养的基础上，加用200 g/L蜂蜜水自由饮用，每隔1 d按大鼠体重灌服油脂10 g/kg，并与油脂一起灌服10 mL/kg白酒，共10 d。然后再放入温度（32±2）℃，相对湿度为95%的人工气候箱中，共5 d。待胃肠湿热型模型造模成功后，再予以TNBS灌肠法制作UC大鼠模型。造UC模型前予禁食24 h，除正常组，其余各组大鼠先用乙醚麻醉，然后从肛门将大鼠灌胃针头轻轻插入，避免损伤肠道，深度约为8 cm，推入TNBS溶液（含25 mL/L TNBS和500 mL/L乙醇）4 mL/kg体重，捏紧肛门平放5 min即可，术后予以常规饲养。待造模4 d后，随机从每组中抽出1只处死并解剖，游离其结肠组织，用生理盐水洗净后，观察距肛门7～8 cm处见肉眼可辨溃疡面，病理检查发现充血、水肿、隐窝脓肿和典型的溃疡等形成，确定造模成功。 　　1.5.2 给药方法与标本留取 确定造模成功后第2天，将大鼠按体表面积折算成成人等效剂量给药，芍药汤组折算后为含生药13.2 g/（kg?d），同理，SASP组折算后为0.5 g/（kg?d）。正常组和模型组大鼠用等体积量生理盐水经胃灌入。每组同时开始按上述剂量给药，1