2013结核病药物敏感性试验教育训练.PDFVIP

QP1601-02 標 題 102 年度結核病藥物敏感性試驗教育訓練 姓 名 陳雅慧 審 閱 者 吳麗卿/ 李健逢 內容： 此次上台北參加 TB 瓊脂平板法藥物感受性試驗教育訓驗，藉由此次研討會與大家分 享心得，因為此方法與細菌組目前使用的方法不同，所以我簡單跟大家分享一下。這次主 要的課程有瓊脂平板法藥物感受性試驗方法及標準操作流程紹介和瓊脂平板法藥物感受性 試驗結果判讀和液態藥物感受性試驗方法及標準操作流程介紹。規範是主要是根據 CLSI M24-A2 。 也可參考疾管局肺結核檢驗手冊。 藥物感受性試驗方法可分 2種， 1.直接法藥敏試驗: 消化去物離心縮檢體且抹片陽性 2.間接法藥敏試驗 : 培養陽性菌株。此次體驗的方法是間接藥物感受性試驗: 以培養分離出 的菌株，調製標準的接種量，用瓊脂比例法測試。接種菌落必須新鮮，勿超過 4∼5星期老 的菌落，小心取，勿刮到培養基。儘可能用原始培養的菌落，勿用次培養的菌落。菌株置 入含有6-10 顆塑膠珠， 3-5 mL Tween-albumin液態培養基或者 Middlebrook 7H9 ，之有蓋 無菌(16×125 mm)試管子中。充份震盪 1 到2 分鐘，勿生氣泡。管子放置 30 分鐘讓大顆粒 沈降，與減少可能產生的氣霧(aerosol) 。上清液吸到另一支無菌管，並用肉湯（如7H9 ） 調濃度到 Mc Farland 1的標準值。進行培養。 瓊脂比例法 ： 結核菌在含藥的培養基生長菌落數比在不含藥的培養基生長菌落數超過 1％，即代表 對該藥產生抗藥性。不含藥的培養基菌落數(colony-forming units, CFU)必須是分開，可數 的。建議用 7H10 瓊脂培養基，7H11 瓊脂培養基有利於 INH 抗藥性的結核菌生長，是可 接受的變通。 兩種配製藥物培養基的方法： 瓊脂稀釋法:將藥溶入瓊脂中，有一格不加藥當對照組每格倒5 mL 培養液，（應含 10 ％ OADC ），讓瓊脂厚度約 3-4 mm ，使用瓊脂應完全乾，如置於放生物安全操作櫃數小 時或隔夜更好，瓊脂表面乾後，立刻用，或置入有封口的塑膠袋 4 到 8℃ ，勿超過28 天，避免光照。 P5-1 編修日期：2011.10.24 紙錠浸出法： 先將5 mL 不含藥的7H10 agar倒入四分格培養皿中，再投入含固定劑量的抗結核菌藥 物紙錠，讓紙錠中的藥浸出到瓊脂中，得到所需的最終濃度培養基。紙錠儘量放入瓊脂中 央位置。每一四分格應確實分裝 5 mL 的培養液，以達到正確的最終藥物濃度。 固態培養接種液製備 ： 1.新鮮菌落 (4-5 週) 2.挑取大範圍菌落(最好選擇初次培養菌落且注意不要刮到培養基) 3.加入 3-5ml 無菌水之無菌試管中(須含玻璃珠)4. Vortex靜置顆粒沉澱 5.菌液濃 度 0.5-1McFarlan 液態培養接種液製備 ： 1.新鮮菌落 (4-5 週) 2.挑取大範圍菌落(最好選擇初次培養菌落且注意不要刮到培養基) 3.加入 3-5ml 無菌水之無菌試管中(須含玻璃珠) 4.vortex靜置顆粒沉澱 5.菌液濃度 0.5-1McFarlan 6.確定抗酸性染色陽性， 7-11培養基劃開菌落確認單一菌種且 BAP培養基培養 48 小 時確認無汙染菌生長結核菌在含藥的培養基生長菌落數比在不含藥的