不同状态下感染根管形成根尖周生物膜的体外模型的建立.ppt

目 录 1 3 5 7 研究内容 创新性 进度安排 课题来源：重庆市卫生局重点项目（2012-1-053） 2 4 6 实验方案、技术路线 可行性分析 参考文献 8 研究背景 和现状 研究目的 第一章 第二章 第三章 第四章 研究内容 一、感染根管生物膜在自然状态下、根管上2/3受干扰状态下、根管全长受干扰状态下通过侧副根管及牙本质小管形成根尖生物膜的体外模型的建立 二、进一步进行感染根管内毒素侵入根尖周组织的定量分析 第五章 第六章 第七章 第八章 目 录 1 3 5 7 研究内容 创新性 进度安排 课题来源：重庆市卫生局重点项目（2012-1-053） 2 4 6 实验方案、技术路线 可行性分析 参考文献 8 研究背景 和现状 研究目的 第一章 第二章 第三章 第四章 实验方案及技术路线 第五章 第六章 第七章 第八章 一、实验方案： 1、基本 （1）灭菌的青霉素瓶、 橡皮塞（随机抽取2个确定灭 菌效果）， 无菌LB琼脂培养基，流动树脂，指甲油，封口胶。 （2）收集离体牙： （3）在超净工作台中，用指甲油封闭离体牙根尖孔，试剂瓶内注入等量的LB琼脂培养基，用橡皮塞将离体牙固定在试剂瓶内，使离体牙全长没入培养基，封口胶及流动树脂密封。 纳入标准：选取本院因正畸减数拔除的前磨牙80颗，患者年龄为14-25岁，根尖孔已发育完成且无龋坏、 根尖周炎及牙周疾病。 拔牙前处理：拔牙前嘱患者用3%双氧水含漱，碘伏消毒术区。 离体牙处理：将新鲜拔除的牙齿立即放入无菌蒸馏水中，送往实验室，在超净工作台中无菌蒸馏水冲洗3遍，备用。 第一章 第二章 第三章 第四章 实验方案及技术路线 第五章 第六章 第七章 第八章 一、实验方案： 2、分步： （1）制备根管-根尖周复合体模型80个 （2）10个模型用于对照组，另70个模型每20个分别用于自然状态下（组1）及2/3受干扰状态下（组2），还有30个用于全长受干扰状态下（组3），共4组。 （3）对照组于第14天取出模型， 组1于第7天及14天各取出10个模型， 组2开髓后暴露于空气中，于第7天将拔髓针插入根管上2/3拔髓，分别于第8天及14天各取出10颗， 组3开髓后暴露于空气中，于第7天采用冠向下技术行根管预备至F3,止点位于根尖孔1毫米。分别于根管预备完成后、第8天及14天各取出10颗。 分别将试剂瓶内培养基分为两份，一份应用PCR检测是否有细菌,如果检测到细菌，进一步观察根尖生物膜；另一份用于检测内毒素含量 PCR技术（定性）： 1.设计引物： 27F(5`-AGAGTTTGATCC TGGCTCAG-3`)，1492R(5` -GGTTACCTTGTTACGACT T-3`)，检测目标：16srDNA 2.煮沸法裂解细菌胞壁 第一章 第二章 第三章 第四章 实验方案及技术路线 第五章 第六章 第七章 第八章 一、实验方案： 内毒素检测： 终点显色法基质鲎试剂盒 第一章 第二章 第三章 第四章 技术路线 第五章 第六章 第七章 第八章  建立根管-根尖周模型 21天、3个月检测 试剂瓶蒸馏 水中的细菌 开髓 观察根尖生物膜 检测到细菌 21天、3个月检测 试剂瓶蒸馏 水中的细菌 扫描电镜 实验组 不开髓空白对照组 开髓，第7日 预备根管上2/3 根管预备后、 21天、3个月检测试剂 瓶蒸馏水中的细菌 开髓,第7日 预备根管全长 根管预备后、 21天、3个月检测试剂 瓶蒸馏水中的细菌 统计学分析 目 录 1 3 5 7 研究内容 创新性 进度安排 课题来源：重庆市卫生局重点项目（2012-1-053） 2 4 6 实验方案、技术路线 可行性分析 参考文献 8 研究背景 和现状 研究目的 第一章 第二章 第三章