影响幼胚培养的因素.PPTVIP

第三篇植物细胞工程 第11章植物组织培养 第12章植物的快速繁殖 第13章体外单倍体诱导与单倍体育种 第14章植物胚胎培养 第15章体细胞胚胎发生和人工种子 第16章植物原生质体融合技术 第17章植物染色体工程 第18章植物转基因技术 第14章植物胚胎培养 1.胚培养(1,embryo culture) 1.1成熟胚培养 1.2幼胚培养 1.3胚培养的意义 2.子房培养(3,ovary culture)：胚珠培养(2,ovule culture) 2.1材料的选择 2.2培养基 2.3接种方式 2.4单倍体的来源 3.被子植物胚乳培养(4,endosperm culture) 3.1植物胚乳的发育特性 3.2影响胚乳培养的因素 3.3胚乳培养的意义 4.胚珠培养 思考题 雌蕊结构 1.1成熟胚培养 成熟胚(mature embryo)：指子叶期以后发育至具有胚芽、胚柄、胚根和子叶的胚。 成熟胚培养(culture of mature embryo)：指将子叶期以后的胚从母体上分离出来，在适宜条件下，使其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 培养方法步骤：成熟种子→75％酒精表面消毒数秒至数十秒→漂白粉饱和水溶液或0.1％氯化汞水溶液消毒5～15min→无菌水冲洗3次→无菌解剖种子→取出成熟胚→接种于简单培养基上培养 培养条件：常规培养，无机盐、糖、氨基酸。 意义：克服自然状况下，植物种皮对胚胎萌发的抑制作用，提早打破休眠，使胚胎立即萌发。 1.2幼胚培养 植物幼胚培养(culture of immature embryo)：指将子叶期以前的幼小胚从母体上分离出来，在适宜条件下，使其进一步发育形成幼苗的过程。 主要培养方法步骤：表面消毒，无菌解剖种子(高倍解剖镜)，接种培养基。胚胎所处的发育时期越早，越难培养。 培养基要求： 常规基础培养基，无机盐、糖、氨基酸、维生素； 可添加胚乳汁液、幼嫩种子及果实提取液、酵母提取物(YE)、麦芽提取物(ME)等天然物质促进幼胚的生长； 幼胚萌发培养对激素要求不严格。 幼胚培养中常见的三种生长方式： 1)胚性发育(embryonal development)：幼胚接种到培养基上后，仍按在活体内的方式发育，最后形成成熟胚，再按种子萌发途径出苗形成完整植株。 多为一幼胚形成一植株 2)早熟萌发(early mature sprouting，precoeious germination)：幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而在培养基上迅速萌发成幼苗。 有时会因细胞分裂产生大量胚性细胞，形成多个丛生胚状体，而形成多个植株。 3)愈伤组织(callus)：幼胚离体培养中先发生细胞增殖，形成愈伤组织。 多为胚性愈伤组织，易分化形成植株。 1)胚性发育(embryonal development)：幼胚接种到培养基上后，仍按在活体内的方式发育，最后形成成熟胚，再按种子萌发途径出苗形成完整植株。 正常胚胎发育：未成熟胚在适宜的培养条件下，可以维持胚的生长，继续进行正常的胚胎发育过程，直至形成再生植株。 胚性发育：幼胚生长增大至正常胚大小甚至超过正常胚，但不能萌发成幼苗。可通过提高培养基渗透压进行调整，也可用生长素或天然营养物调节，使胚正常生长。 幼胚指胚龄处于早期原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚。 1.3胚培养的意义 1.3.1胚培养克服远缘杂交不孕和幼胚败育 远缘种、属间杂交是植物育种的重要手段。 Laibach在1925～1929年，亚麻种间杂种的培养幼胚获得了种间杂种成功。 杂交不孕现象可能的原因：杂交不亲合，或幼胚败育。 杂交不亲合的解决措施：试管受精技术。 幼胚败育的挽救措施：胚培养技术，离体条件下促使幼胚发育健全，诱导产生杂种植株。 例，杏、桃和葡萄早熟品种、无核品种。 王发林等(2003)：改良SH+6-BA1.0mg/L、IAA1.0mg/L，促进幼胚萌发，获得李、杏杂交植株。 王爱华等(2003)：1/2 MS+蔗糖3％，甜樱桃盛花后45d取样，60～80d低温或GA3(15 mg/L)处理后，接种培养后成苗率达到63％。 1.3.2成熟胚培养快速繁殖 自然繁殖率低的植物，胚培养技术可加速苗木繁殖速度。 陈永勤等(1998)用自行设计培养基和B5培养基培养了红豆杉种子的成熟胚，97％以上胚萌动，远高于自然繁殖萌芽率。 计巧灵(2003)用1/2MS培养基，27℃下培养去壳、消毒处理的紫草种子，6～7d后种胚萌发至约1cm，切下子叶和胚轴作为外植体接种到诱导培养基上，诱导产生愈伤组织，通过继代培养、分化培养