第2章5 薄层色谱方法.ppt

一、薄层色谱法的概述 二、薄层色谱法的技术参数 三、薄层色谱法的基本操作 改性硅胶 （2）氧化铝 用氧化铝可分离萜类、生物碱类、脂肪类及芳香族化合物，因制备方法和处理方法的差别，氧化铝有弱碱性（pH=9~10)、酸性(pH=4~5)及中性(pH=7~7.5)之分，因此其使用范围也有所不同。 它在薄层色谱法中的应用范围仅次于硅胶。 （3）其他固定相 2、粘合剂及添加剂 （2）添加剂 吸附剂及预制板包装上部分符号及含义 3、薄层板的制备方法 洗净的玻璃板用乙醇擦拭干净，挥干乙醇后，用手动或自动涂布器（最好用自动涂布器）将已调制好的固定相均匀地涂铺在玻璃板上，涂布后的薄层板应水平放置，室温阴干备用。 制备薄层板时的注意事项 薄层板活化的原因 （二）点样 几种不同点样方式的比较 （三）展开 1、展开室 平面色谱的展开有三种几何形式即线性、环形及向心。其中最常用的有线性展开和多次展开。 线性展开：上行展开、下行展开、双向展开、近水平展开、水平展开。 3、展开剂 溶剂分成6类：第Ⅰ类为电子授受体溶剂；第Ⅱ类为质子给予体溶剂；第Ⅲ类为强质子给予体溶剂；第Ⅳ类为质子受体溶剂；第Ⅴ类为偶极作用力溶剂；第Ⅵ类为惰性溶剂（即非极性溶剂）。 （2）溶剂强度 展开剂的选择方法：三角形法。根据展开剂、固定相及被分离物质三者间的相互影响，三者的关系如下： 4、影响薄层展开的因素 饱和对展开影响很大，因此对展开室的饱和及对薄层的预平衡非常重要。 （3）温度的影响 展开时环境的温度对薄层色谱的展开影响很小。通常在室温下进行展开。 （四）定位 光学检出法的使用范围： 光学检出法使用方便，被检出物质不被破坏，适用于双向展开，多次展开等的定位，也宜应用于洗脱定量时定位，是平面色谱定位的首选方法。 3、试剂显色法 分离后的化合物在紫外光或可见光下不能显示斑点，可根据被检出化合物的理化性质选择适当的显色剂使之生成颜色或荧光稳定、轮廓清楚、灵敏度高、专属性强的斑点。 这种方法是通过一种或几种试剂与被检物质产生化学反应，生成有色物质，是平面色谱广泛应用的定位方法。 （2）显色试剂 显色试剂有通用显色剂和专属性显色剂。 （五）定性与定量 定量方法分为间接定量（洗脱测定法）和直接定量（原位薄层扫描法）两种。 ② 原位薄层扫描法 四、薄层色谱法的应用 （1）必须先要制备固定相匀浆，由于固定相及粘合剂类型不同，性能也不同，匀浆时加水量也不同。匀浆搅拌时应朝同一个方向进行，以减少气泡的产生。 （2）涂布时速度要快，避免固定相过度凝固给涂布带来困难，涂布速度要求均匀，涂布后的薄层晾干时应在阴凉的地方，避免因通风而导致层面产生裂纹；应保持水平放置。 （3）定性定量时用的薄层固定相厚度为0.2~0.3mm，制备薄层的厚度要求约0.5~2mm。 4、薄层板的活化 手工制的硅胶或氧化铝薄层板，涂布晾干后有时必须经过活化才能使用。 薄层分离物质与吸附剂表面及其孔隙表面的活性点的强度和数目有关。活性点的强度及数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，不同物质在吸附剂上被吸附的能力不同，则可以彼此分离。 薄层活度大小受大气相对湿度的影响，吸附剂表面能可逆地吸收水分。如果大气湿度过大，薄层活度过低，对分离效果会产生影响。 为了提高薄层活度则必须将室温晾干的薄层板在点样前根据活度要求在一定温度下活化。一般晾干后的薄层板在105~120℃条件下干燥0.5~1h。 在点样前，应将薄层板在日光或紫外光下检查板面有无损坏或污染。 点样时通常使用点样针和毛细管进行点样。 毛细管规格(mm)：内径Φ0.1、0.2、0.3、0.4、0.5×长度100。 注意：点样时点样针或毛细管不能划破载板上的固定相。 点状点样：原点直径5mm，一般为3mm（经典薄层）和 1~2mm（高效薄层）。 带状点样：展开后的斑点不仅分辨率明显高于点状点样，而且精密准确，为定量分析提供最佳条件。 常用的点样方式：点状点样和带状点样。 1. 原点直径过大会降低分辨率及分离度；尽可能避免多次点样。 2. 点样量：经典薄层一般为1~5ul，高效薄层为100~500nl，总量不要超载。 3. 点样速度尽可能快，耗时尽可能短。 注意： 硅胶的硅醇基以氢键的形式优先吸附水，吸水速度很快，因此应用预先经过活化的薄层板。在点样时也会立即吸附空气中的水蒸气，因此在点样时可用干净的玻璃板盖住活化的薄层板，只留出原点区域以便点样。 A.长5~60mm，内径为0.2~0.05mm的熔融石英管； B.微量注射器，机械控制，接触板面点样； C.同B，用步进