骨桥蛋白及β连环蛋白在食管鳞癌组织中表达及意义.docVIP

骨桥蛋白及β连环蛋白在食管鳞癌组织中表达及意义 　　【摘要】目的 研究骨桥蛋白（osteopontin.，OPN）及β-连环蛋白（β-catenin）在食管鳞癌中的表达及与其临床意义。方法 应用SP免疫组化技术检测60例ESCC及其相应的癌旁正常组织中骨桥蛋白和β-catenin的表达。结果 食管鳞癌组织中OPN和β-catenin阳性表达率分别为80%（48/60）和65%（39/60）， 与癌旁正常组织中的阳性率0（0/60）、91.7%（43/60），差异有统计学意义（P0.05）；骨桥蛋白和β-catenin的在食管鳞癌中的表达与临床分期、淋巴结转移有关（P0.05），β-catenin的表达与肿瘤分化程度有关（P0.05）。食管鳞癌组织中OPN 与β-catenin 的表达呈负相关水平， 且Spearman相关系数=-0.280 （P0.05）。结论 骨桥蛋白和β-catenin在食管鳞癌组织中的异常表达均与食管鳞癌的发生、发展相关，二者的联合检测可为食管鳞癌的诊断和治疗提供重要信息。 　　【关键词】食管鳞癌；骨桥蛋白；β-连环蛋白；免疫组织化学 　　我国处于世界食管癌高发地带，死亡率高，目前分子生物学的发展促进了食管癌病因学的研究及靶向治疗的进展。骨桥蛋白（osteopontin.， OPN）是一种糖基化磷酸化蛋白，具有分泌性、粘附性，在人许多肿瘤中过量表达。β-连环蛋白（β-catenin）参与E-cad/cat复合体的形成，与细胞粘附有关，而且在wnt信号传导通路中与下游多个因子作用，参与细胞的增殖和分化。本研究应用免疫组化法探讨骨桥蛋白及β-连环蛋白在食管鳞癌中的表达与食管鳞癌临床分期，分化程度，转移的关系，以及骨桥蛋白及β-连环蛋白表达之间的相关性，为食管癌转移和预后提供客观生物学指标。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 60例标本是本院外科2009年1月至2012年7月手术切除食管癌标本（同一病例包括癌组织、距肿瘤上、下缘5 cm以外癌旁正常组织），HE切片病理证实为鳞癌。其中男33例，女27例；年龄35～73岁，中位年龄50岁。高分化为34例、中、低分化26例，其中31例有淋巴结转移，29例无淋巴结转移。按TNM分期标准，Ⅰ+Ⅱ期29例，Ⅲ+Ⅳ期31例；按浸润深度分，T1+ T225例，T3+ T435例。选取60癌旁正常组织例作为对照。 　　1.2 试剂 浓缩型抗OPN鼠抗人单克隆抗体、β-catenin鼠抗人单克隆抗体及免疫组化试剂盒及DAB试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 免疫组化（SP法） 取厚4 μm石蜡切片，常规脱蜡、水化后，采用电炉加热煮沸修复抗原，OPN，β-catenin单克隆抗体均按1∶ 100稀释，操作参照产品说明书。工作液浓度均为1∶ 100，以磷酸缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。用已证实的OPN、β-catenin染色阳性食管鳞癌切片作阳性对照。 　　1.3.2 免疫组化结果判定 在光镜下任意选择5个具有代表性的高倍视野，每个视野分别计数200个细胞，共计1 000个细胞。骨桥蛋白：①阳性标准为：细胞质呈棕黄或棕褐色为阳性细胞。据染色程度及阳性细胞数来计算评分：a染色程度：0为阴性，1为弱阳性，2为中等阳性，3为强阳性b阳性细胞数：无阳性细胞为0，阳性细胞1%～25%为1，阳性细胞25%～50%为2，阳性细胞50%为3。a+b为3～6分者评为免疫组织染色阳性。②计数方法：结果判定在双盲法下进行，每张切片由两名病理医师分别判断。两者不一致时重新计数。 　　β-catenin着色于细胞膜，其染色标准参照文献，将染色强度分为3级：无着色（1级），浅黄色（2级），棕黄色（3级）；依据镜下阳性染色细胞数占癌细胞总数的百分率综合判断，阳性细胞数≤25%为l级，26%～75%为2级，≥75%的为3级。每张切片的最后得分为2次评分的乘积（1～9），将1～9分为两级，7为阳性表达（+），7为阴性表达（-）。 　　1.4 统计学方法 应用SPSS 13.0统计软件包进行χ2 检验及Spearman相关， 以P0.05 作为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 骨桥蛋白，β-catenin在食管鳞癌中的表达 60例食管鳞癌组织中，48例OPN 染色阳性（80.00%）， 在食管鳞癌组织中，OPN主要存在于肿瘤细胞的细胞浆中。OPN多弥散表达于癌巢中，在癌巢边缘分布较少。在60例癌旁正常组织未见OPN表达，两组间相比差异有统计学意义（P0.01）。β-catenin在癌旁正常组织中表达均位于细胞膜，胞浆未见明显的阳性信号。癌旁正常组织和癌组织中β-catenin阳性表达率分别为91.7%（55/60）和65