实验一：检测生物组织中的糖类,脂肪,蛋白质.docVIP

实验 检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质 一、实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 颜色反应: 还原糖+斐林试剂 砖红色沉淀 淀粉 +碘液 蓝色 脂肪 +苏丹Ⅲ/Ⅳ 橘黄色/红色 蛋白质+双缩脲试剂 紫色络合物 二、实验步骤： 1、检测还原糖 2、检测脂肪 3、检测蛋白质 4、检测淀粉 注意事项： 还原糖的检测和观察：?还原糖有葡萄糖，果糖，麦芽糖；甲乙液必须等量混合均匀后再加入样液中，现配现用；必须用水浴加热脂肪的鉴定：切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊。?酒精的作用是：洗去浮色?需使用显微镜观察?使用不同的染色剂染色时间不同 蛋白质的鉴定：先加A液1ml，再加B液4滴鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比 可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如： 葡萄糖 + Cu2+ + 4OH— ? ? 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O 即Cu 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。淀粉遇碘变蓝色。脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞内。苏丹三染液其实是苏丹三固体颗粒溶于高浓度乙醇（70%-95%,多用95%）配制而成的,而脂肪同样较易溶于高浓度乙醇,所以染色时间长了就会让样品中的脂肪溶解,洗浮色的时候被洗掉,就观察不到了 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹，苏丹，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。组织切片染色蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。） 观 察 洗浮色（50%酒精） 染色2min（苏丹Ⅲ染液） 观 察 50～65℃水浴加热3min 斐林1ml（甲液和乙液混合） 待测样液2ml 加热 花生子叶薄片1片 观 察 双缩脲B液4滴 双缩脲A液1ml 待测样液2ml 50～65℃水浴 观 察 碘液2滴 待测样液2ml