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高效液相色谱法测定14种人参皂苷研究 　　摘要：为准确可靠的定量分析14种人参皂苷，本文通过对高效液相色谱条件进行优化，确定了测定人参皂苷的HPLC条件，结果表明，最佳分析条件流动相为乙氰和水；C18柱；检测波长：203纳米；流速：1.0 毫升/分。该分析方法可以达到很好的分离效果，通过精密度、稳定性和回收率的计算，证明该方法具有良好的准确性和稳定性，是一种简单、高效的多种人参皂苷分析方法。 　　关键词：人参皂苷；高效液相色谱；检测方法 　　中图分类号： R49 文献标识码：A 文章编号： 1674-0432（2014）-12-22-2 　　1 材料与方法 　　1.1 药品及试剂 　　 人参皂苷标准品Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD，三七皂苷标准品R1均购自成都曼思特生物科技有限公司；乙氰、甲醇为色谱纯均购自美国TEDIA公司。 　　1.2 实验仪器 　　 Agilent 1100型高效液相色谱仪购自美国安捷伦公司。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 色谱条件 色谱柱：BDS HYPERSIL C18柱（250 毫米×4.6毫米，5微米）；柱温：25℃；检测波长：203纳米；流动相：水（A）和乙氰（B）；流速：1.0 毫升/分；梯度洗脱条件见表2.1。上述条件下标准混合溶液的分离效果见图1.1。 　　表1.1 高效液相色谱流动相梯度洗脱条件 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　图1.1 13种人参皂苷和1种三七皂苷混合标准溶液的HPLC图 　　（1, R1; 2, Rg1; 3, Re; 4, Rh1; 5, Rb1; 6, Rc; 7, F1; 8, Rb2; 　　9, Rd; 10, F2; 11, Rg3; 12, C-K; 13, Rh2; 14, PPD.） 　　1.3.2 溶液的配制 分别称取人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1标准品（精确至0.1毫克），溶解于甲醇，得到14种皂苷的混合标准溶液。 　　1.3.3 标准曲线的绘制 取不同浓度的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混标溶液，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，各单体皂苷浓度为横坐标，绘制标准曲线。 　　1.3.4 精密度实验 精密吸取稀释后的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混标溶液，重复进样5次，测定含量，记录皂苷峰面积，计算平均值。 　　1.3.5 稳定性实验 精密吸取稀释后的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混标溶液，分别于0、2、4、8、10小时进样，测定含量，记录皂苷峰面积，计算平均值。 　　1.3.6 加样回收率实验 精密称取已知含量的人参根总皂苷，分别精密加入人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1标准品，按照样品溶液制备方法制备，在相同色谱条件下，测定含量并计算回收率。 　　2 结果与讨论 　　2.1 标准曲线、线性范围、检出限（LOD）与定量限（LOQ） 　　 以13种人参皂苷和1种三七皂苷的色谱峰面积对浓度作线性回归，由表1.2可看出，呈良好的线性关系，线性相关系数r2值均大于0.998。以峰强度与噪声比（S/N）为3确定最低检出限（LOD），该方法测定14种皂苷的检出限为0.0015~0.006 毫克/毫升；以S/N为10确定最低定量限（LOQ），本方法的定量限为0.005~0.02毫克/毫升。 　　表1.2 回归分析、检出限和定量限 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　2.2 精密度 　　 精密吸取稀释后的14种皂苷混标溶液，重复进样5次，以峰面积计算，14种皂苷峰面积的相对标准偏差（RSD）均小于2%，结果见表1.3。 　　2.3 稳定性 　　 精密吸取吸取稀释后的14种皂苷混标溶液，每隔2小时测定1次，以峰面积计算，14种皂苷峰面积的RSD均小于4%，结果见表1.4。 　　 表1.3 精密度实验结果 表1.4 稳定性实验结果 2.4 加样回收率实验 14种皂苷的回收率为85.0%~118.8%，结果见表