RFLP原理及在作物基因定位及育种中的应用.pdfVIP

第28拳第《襄 薄 袁 职 技 舜 睫 学 摄 Vol。28No，4 JournalofHenanVoc8tion—TeehnicalTeachef8 Colloge 黄中文1，王 爨1，辛 慧。，刘明久1 (i．河南职技师院，河南薪乡4530∞；2．台前第一职离，河南台前457600) 摘要；系统玲绍了RFLP的摄念、原理、特点 片段的缺失、插入、辱健、倒位等o“。 及其在实验操作中魔注意的事项，总结了 R黯P技术耀子薹米、瘩稻莓捧镌姆基爨定垃 以及在育种上的研究成果．燎后讨论了RFLP 技术在实鹱痘焉串存在瓣篱越。 片段翻谱从一代到下～代并来有侮改变，即 关键镯：RFLP；锋转{基琏定毯；弯秘 中圈分类号：Q789 文献标识碣：A 越，其鸯黻下特点“。一“： 文蠢编号：1003—482X(2000)04—0024～04 种，还怒系内不同个体之问都存在RFl。P变异。 l RFLP的原理及其特点 RFLp是樊文R￡stfietion 睫，其他变异均怒从轰型或莲困捧用产物寒研究 F揩禽fnent己e翻薯tb 遗传和变异的，1ili Polymorphism的缩写，巅即嫩制性片段长度多淼 戒。 往。RFLP技术首先由Grodz堪er等甭在aden～ ovif#ses瀑寝敏感突变糕因宠往上，后叉在拣建 (3)比生豫檬记受丰富+区分姥力更强。 人类遗传图的可行性上进行了讨论”“…。其理论 依撼是f糟限翩性内切酶薅解样品DNA，扶丽产显往，谢且罪等馥莲嚣翔无鬣作。 生大爨静限制性片段，遥蛙凝默邀溶将DNA片 段按照各真的长度羚开。当酶解片段数量比较多 2基本实验程序和主要影响嫂索 对(比如酶解动植物纂囡缀DNA)，电泳詹虽按片 段妖度努殍，整实琢铅是形痰莲续～片静带，免了 2．1 RFLP实验藏疆 把多悉片段检测出来，需将凝胶上的DNA变性， 2．1．1 涌过Southern转移羹支持膜上(硝酸纤缭紊滤簇。。 藏慰熊袋)，使DNA单镰与支持骥牢固绪台，荐 黑鳋同位索或蟪高辛掭记的撵针与膜上的酶甥片 段分子杂交，通过放射自摄影驻示出杂交带，不弼 褥瓣矗示豹杂交带经蟹不弱，鄄礁高RFLP。驾铡 用尉一种限制性内切酶，酶解不同品种或同一品 mM 7mM 种的不同个体时，由于目标DNA既有同源性又 triS—HCl，1．1NaCl，16．7mM 祷变异，毽蓊酶镯片段长赘靛纛差异，这种差舅载 是RFl巾。这种DNA分子水平上的差异，可能是 由于肉仞酶识剐序列的政变，谯可熊涉及到部分 收稿日甥：1999—12—22． 万方数据 柞者简介：黄中文(1口71-)。男，河南潢川人，硕士．助教。 第4期 赞中文等；RFLP蘼理藏英在捧耪基菠定位和蠢静中辫应簿 2s TE溶解。最后用苯酚：氯仿(1：1)和氯仿：异戊醇 6m 薯和小麦等n (24：1)纯毽，簿予蕈E，翔RNA酶A，予37℃缳溢 O．5h，保存在4。e冰箱中。 2．1+2酶切反藏每pgDNA加o．25单位的限 制饿内留酶，在37℃承游书反应o．5h，段出救在 {℃球籍保存备鬻。