【名称】脑脊液氨基酸.PDFVIP

【名称】脑脊液氨基酸 【英文名】amino acid in cerebrospinal fluid 【别名】 【概述】 神经系统中存在有大量的游离氨基酸，这些物质除参与神经系统的一般代 谢过程与维持细胞内，外水分及电解质平衡外，还做为化学传递物质参与神经 兴奋及抑制调节，对神经细胞有兴奋作用的氨基酸如谷氨酸、天冬氨酸等酸性 氨基酸，具有抑制作用的如 γ氨基丁酸(GABA)与甘氨酸。谷氨酸在脑及脊髓内 含量丰富，以大脑半球和小脑中为最多；门冬氨酸在腹角灰质中含量较高，这 两种氨基酸可为神经兴奋性递质。γ-氨基丁酸在脑中含量甚多，不参与蛋白质 的构成，而在脑能量代谢中占重要位置，可为一种重要的抑制递质；甘氨酸中 的游离型存在于整个中枢神经系统、脑脊液、血清和其他组织中，以脊髓灰质 中的浓度最高，脑的甘氨酸可能来自血浆或脑蛋白的分解及由葡萄糖和丝氨酸 转变而来。目前推测甘氨酸可能是脊髓中何神经元的抑制性递质。 【原理】 单向纸层析或薄层层析法均不能使几十种氨基酸完全分离，双向层析是将 已经过单向层析的滤纸或薄层层析板旋转90度后，再用其他溶剂进行层析，使 单向层析时未分离的氨基酸得到分离。 先利用阳离子交换树脂将血清、血浆、脑脊液和尿液中的氨基酸交换吸 附，用水洗去盐份后，再用氨水将氨基酸洗脱。氨蒸发后，得到较浓和较纯的 含氨基酸样品，再进行双向层析，从而进行鉴定。 含硫氨基酸层析时常得不到满意的分离，可在点样后加H O 使它们氧化成 相应的砜或磺酸，再作层析分离。 【试剂】 (1)脱盐用层析柱：大小如图 1。
型 (2)阳离子交换树脂：Dowex-50×8，50～100目H (3)2mol/L氨水 (4)磺基水杨酸 (5)微晶纤维素薄层层析板 (10cm×10cm) (6)30%过氧化氢 (每 ml中加 0.2mg 钼酸铵作为催化剂)。 (7)层析溶剂：第一向为正丁醇：吡啶 ∶水(1 ∶1 ∶1，V/V)；第二 向为88% 苯酚：25%氨水 ∶水(10 ∶0.05 ∶1，V/V)，每 200ml 加8-羟喹啉 1mg 。 (8)2g/L或5g/L 茚三酮丙酮液。 (9)层析缸、电吹风和点样毛细管等。 【操作方法】 (1)脱盐：取 已过滤的脑脊液 10ml加入装有 5ml Dowex-50×8离子交换树 脂的层析柱内，用100ml蒸馏水淋洗层析柱，流出液弃去。用2mol/L 氨水 30ml洗脱氨基酸。洗脱液在40℃真空蒸发，残渣溶于 1ml蒸馏水中。 脑脊液用 1ml，先经磺基水杨酸 40mg 去蛋白，离心后取上清液 0.5ml加 装有 1ml Dowex 50×8的层析柱内，用40ml蒸馏水淋洗层析柱，流出液弃去。 用2mol/L氨水 15ml洗脱氨基酸。洗脱液在40℃真空蒸发，残渣溶于 0.05ml 蒸馏水。 (2)点样：在薄层层析板的左下角距二边 1.5cm 处，点加脑脊液的脱盐浓缩 液4 μl；点样量以 2 μg氨基氮为度，且直径愈小愈好。 (3)氧化含硫氨基酸：在点样处加 0.5 μl 含钼酸铵 的H O ，在室温放置 30min。 (4)展层：先将薄层层析板置于盛有第一向溶剂的层析缸 中，展层约 60min，即溶剂上升至 9.5cm 处时取出，再在 40℃气流 中吹 30min。将薄层层析 板转 90℃再放入盛有第二 向溶剂的层析缸 中展层约 100min，即溶剂上升至 9.5cm 处时取出在40℃放过夜 。 (5)向薄层层析板喷洒茚三酮试剂，再置 100℃烘箱 30min，观察氨基酸的 紫蓝色斑点，脯氨酸斑点为黄色 。 【正常值】 HPLC 法： 天冬氨酸 (Aspartic Acid，Asp) 1.6±1.7μmol/L 谷氨酸 (Glutamic Acid，Glu) 4.