转谷氨酰胺酶的纯化及酶学性质的研究--毕业论文设计.docVIP

精品 哈尔滨商业大学毕业设计（论文） 转谷氨酰胺酶的纯化 及酶学性质的研究 学 生 姓 名 指 导 教 师 专 业 食品科学与工程 学 院 食品工程学院 年 6 月 10 日 毕业设计（论文）任务书 姓名： 学院：食品工程学院 班级： 专业：食品科学与工程 毕业设计（论文）题目： 转谷氨酰胺酶的纯化及酶学性质的研究 立题目的和意义： 转谷氨酰胺酶以肽链中的谷氨酰胺残基的γ-羧酰胺基作为酰基供体，酰基受体可以是多肽链中赖氨基残基的ε-氨基、伯胺基或水。转谷氨酰胺酶能催化许多食品中蛋白质的交联反应，在很大程度上改善蛋白质的功能性质，提高蛋白质的营养价值，因而在食品工业中具有广泛的用途，此外，转谷氨酰胺酶还可应用于医药、分析检测和生物工程等方面。转谷氨酰胺酶以其优良特性在国外，尤其在日本得到广泛应用，它不仅可改善食品功能特性，也可以通过交联作用，用以开发新的具有更高营养特性新食品资源。主要表现在：该酶能提高蛋白质功能特性和改善其结构，可通过引入赖氨酸等氨基酸而提高蛋白质营养效价，而被其处理果食品具有良好外观和质构，还能延长货架期及减少食品中过敏原，转谷氨酰胺酶在植物蛋白改性方面，也显示出其优越性，对大豆分离蛋白具有很好改性方面，也显示出其优越性，对大豆分离蛋白具有很好改性作用，改性蛋白质，其凝胶性、乳化性、起泡性等功能特性均有较明显改善。 目前，转谷氨酰胺酶已广泛应用于肉制品、乳制品、植物蛋白制品、焙烤制品，但目前国内研究与国外相比尚有很大差距，且具体在我国食品工业中应用更少。本课题通过做一些基础性的研究，主要是对转谷氨酰胺酶进行纯化，并对其性质做一定的研究，希望能为转谷氨酰胺酶在我国的研究，和以后的工业化应用开辟道路。 技术要求与工作计划： 技术要求： 将转谷氨酰胺酶溶解，再经过硫酸铵分级沉淀，超滤脱盐，聚乙二醇浓缩， Sephadex G-100凝胶过滤柱层析四个步骤来完成，再通过SDS凝胶电泳来测其分子量。 工作计划： 本课题主要研究内容为转谷氨酰胺酶的分离纯化，通过四步的分离纯化后，再对转谷氨酰胺酶的性质进行研究，包括对酶最适反映温度、热稳定性、最适pH、pH稳定性及各种金属离子对酶活性的影响。 时间安排： 2010年3月08日-2010年3月18日 资料检索，相关信息的收集。 2010年3月19日-2010年4月01日 总结资料、提交综述 2010年4月02日-2010年4月 08日 实验方案的设计、递交开题报告 2010年4月09日-2010年4月11日 准备试验材料、试剂、仪器 2010年4月12日-2010年4月23日 进行试验，对转谷氨酰胺酶分离纯化 2010年4月24日-2010年4月31日 转谷氨酰胺酶性质的研究 2010年5月01日-2010年6月09日 数据整理及论文的提交、答辩准备 指导教师要求： （签字） 年 月 日 教研室主任意见： （签字） 年 月 日 院长意见： （签字） 年 月 日 毕业设计（论文）审阅评语 一、指导教师评语： 指导教师签字： 年 月 日 毕业设计（论文）审阅评语 二、评阅人评语： 评阅人签字： 年 月 日 毕业设计（论文）答辩评语 三、答辩委员会评语： 四、毕业设计（论文）成绩： 专业答辩组负责人签字： 年 月 日 五、答辩委员会主任单位： （签章） 答辩委员会主任职称： 答辩委员会主任签字： 年 月 日 精品 摘　　要 转谷氨酰胺酶通过硫酸铵分级沉淀，超滤脱盐，聚乙二醇浓缩， Sephadex G-100凝胶过滤柱层析进行纯化，上述提纯步骤得到酶活回收率为27.30%，纯化倍数为10.42。经SDS检验蛋白纯度，得到单一区带，并得出转谷氨酰胺酶的相对分子质量为3.8?104。 对转谷氨酰胺酶酶学性质进行研究，得到该酶的最适反应温度为40℃，最适pH为6.0，该酶的温度稳定范围在35℃～45℃，pH稳定范围在5.0～7.0，Ca2+、Mg2+、Ba2+对转谷氨酰胺酶的活性几乎没有影响，而Fe3+、Cu2+、Zn2+ 抑制转谷氨酰胺酶的活性。 关键词：转谷氨酰胺酶；分离纯化； 酶学性质 Abstract The transgulaminase was purified using saturation of ammonium