遗传病的分析DA扩增产物的鉴定.pptVIP

遗传病的分析5DNA扩增产物的鉴定 限制性内切酶酶切技术 琼脂糖凝胶电泳技术 一、限制性内切酶酶切技术 原 理 限制性内切酶大多由大肠杆菌中提取纯化得到，能特异性识别和切割双链DNA分子中的特异序列（一般识别4－6个核苷酸序列） 由于大多数内切酶具绝对的位点特异性，因此可以选择合适的内切酶切割扩增产物，通过片段大小鉴定基因是否有缺失或缺陷。 原 理 本实验使用限制性内切酶（Lwe I） ，酶切位点： 5′….GCATC(N)5↓…3′ 3′….CGTAG(N)9↑….5′ 正常人样品具有酶切位点，能够被酶切开，分成2个片断；而病人组G则被A替代，酶切位点丧失，不能被酶所切动，所以还是１个片断。 器材与试剂 高速离心机、恒温水浴箱、移液枪、枪头、塑料离心管等 Lwe I限制性内切酶、三蒸水、缓冲液等 操 作 1、取样品2份（病人、正常人PCR扩增产物） 无菌ddH2O 14ul 缓冲液10× 2ul 扩增产物 3.5ul 内切酶 0.5ul 2、置37oC水浴3h（或过夜） 注意事项 内切酶需在－20℃环境中保存。 内切酶活性的发挥需要Mg2＋ 。 为使酶反应时达到最佳条件，需使用生产厂商提供的反应条件