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图6-23 逆转座子的转座机制 * * 三、转座的分子机制 * * 图6-26 由DDE转座酶介导的转座子三种剪切方式 DNA重组是指发生在DNA分子内或DNA分子之间核苷酸序列的交换、重排和转移现象，主要包括同源重组、位点特异性重组和转座重组。 同源重组是两个DNA分子的同源序列直接进行交换。细菌的接合、转导、转化和真核细胞的同源染色体之间的交换等都属于同源重组。解释同源重组的模型有Holliday 模型、Aviemore模型（单链断裂模型）和双链断裂模型。三种模型在重组过程中形成χ状的Holliday连接是一致的。同源重组的基本步骤包括：链断裂与切除、链侵入、退火与合成、形成Holliday 结构、Holliday连接的分离和交换。 * * 参与E. coli同源重组有关的蛋白质包括：RecA蛋白、RecBCD蛋白、RuvA、RuvB和RuvC蛋白等。RecA蛋白参与E. coli所有的同源重组途径。RecA的主要功能有促进2个DNA分子之间链的交换，以及作为共蛋白酶促进LexA 阻遏蛋白的自我水解。RecBCD蛋白由RecB、RecC和RecD三个亚基组成，具有外切核酸酶V、解链酶、核酸内切酶、ATP酶和单链DNA外切酶共五个酶活性。RuvA蛋白能识别Holliday连接，协助RuvB蛋白催化分叉的迁移。RuvB蛋白是一个解链酶，其功能是催化Holliday连接中分叉的迁移。RuvC蛋白是一种特殊的核酸内切酶，催化Holliday连接的分离，因此被称为解离酶。 * * 发生在E. coli的同源重组途径有RecBCD途径、RecF途径和RecE途径。真核生物的同源重组主要发生在细胞的减数分裂的前期I的两个配对的同源染色体之间。同源重组也会发生在DNA修复之中，用以修复DNA双链断裂、单链断裂和链间交联。适合真核生物同源重组的模型应该是双链断裂模型，参与同源重组的主要蛋白质有Rad50、Mre11、Nbs1、Spo11、MSH4、Dmc1、PCNA、RPA和DNA聚合酶δ/ε等。 * * 位点特异性重组是指在DNA特定位点上发生的重组，需要专门的蛋白质识别发生重组的特异性位点并催化重组反应。位点特异性重组也发生链交换、形成Holliday连接、分叉迁移和Holliday连接解离。位点特异性重组可以发生在2个DNA分子之间，导致2个DNA分子之间发生整合。位点特异性重组也可以发生在1个DNA分子内部，可能导致缺失或倒位。位点特异性重组的功能包括：调节噬菌体的整合、调节基因表达、调节胚胎发育期间程序性的DNA重排。 * * 转座重组是指DNA上的核苷酸序列从一个位置转位或跳跃到另外一个位置的现象，在原核生物和真核生物的基因组内均可以发生，发生转位或跳跃的核苷酸序列被称为转座子。转座子的靶点与转座子并不存在序列的同源性，接受转座子的靶位点可能是随机的，也可能具有一定的倾向性，这与转座子本身的性质有关。转座事件可导致基因组内核苷酸序列发生转移、缺失、倒位或重复。转座子本身还可能作为细胞内同源重组系统的底物。 * * 两个转座子之间发生的同源重组可导致缺失、插入、倒位和移位。细菌内的转座子分为插入序列、复杂型转座子、复合型转座子和Mu噬菌体四类。 转座机制分为 “剪切”和“粘贴”机制以及“复制”和“粘贴”机制。原核转座子与真核转座子的差别主要反映在转座的机制上：真核生物转座过程中的剪切和插入是分开进行的，转座子的复制很多通过RNA中间物来进行。 * * 根据转座的机理将真核生物的转座子反转座子和DNA转座子。反转座子在结构、性质和转位的方式上与逆转录病毒的复制相似。根据两端的结构，反转座子可进一步分为LTR反转座子和非LTR反转座子。果蝇基因组上的Copia 元件和酵母体基因组上的 Ty元件属于LTR反转座子， LINE和SINE属于非LTR反转座子。 * * 复习思考题 重组有几种类型？ 同源重组的条件和分子机制是什么？ 举一个位点特异性重组的例子。 试介绍玉米的Ac～Ds系统。 图6-6 RuvC的作用模型 * * 4. 其它同源重组蛋白 在E. coli中大概有30种蛋白质与同源重组有关，除了上面详细介绍的几种以外，还有： RecE，RecJ，RecQ，RecF，RecR，RecT，RecG，Rus，RecN，SbcA，SbcB，SbcC，SbcD，DNA拓扑异构酶I；DNA旋转酶；连接酶；聚合酶I；DNA解链酶II；DNA解链酶IV；SSB。 * * E. coli主要有三条同源重组途径，其中的许多成分是SOS-诱导的，这意味着它们在细胞中正常的功能可能是重组介导的DNA修复。 用于基因工程的某些菌株其参与重组的基因几乎都无活性，这有利于防止大的质粒之间和质粒与染色体之间发生不必要的重组。 * * 三、E.