HT通过TRPC通道促进肺动脉平滑肌细胞增殖.DOCVIP

5-HT通过TRPC通道促进肺动脉平滑肌细胞增殖 Abstract Introduction 肺动脉高压存在肺血管收缩和舒张失衡。肺小动脉重构是主要的病理改变之一。血管重构包括外膜、中膜、内膜的重构，目前认为肺动脉高压时肺小动脉中膜增厚主要以平滑肌细胞增殖改变为主。围绕肺动脉平滑肌细胞增殖的机制研究是肺动脉高压机制研究的一个重要方向。在肺动脉高压发生过程中，肺小动脉的中膜平滑肌细胞增殖，导致形成肌化的小动脉，使远端动脉的阻力增加，促进肺动脉高压形成。多种血管活性物质如5-HT、内皮素、血管紧张素和生长因子如血小板衍生生长因子、表皮生长因子、转化生长因子等可以促进肺动脉平滑肌细胞增殖。 5-HT也被称为血清素，是一种重要的神经递质，参与食欲、睡眠、记忆学习、情绪等神经系统生理功能的调节，同时也参与肌肉收缩、心血管系统等的功能调节。5-HT储存于血小板中，血浆中的5-HT水平很低。上世纪60年代发现服用食欲抑制药物可导致肺动脉高压[233]。之后，5-HT与肺动脉高压的关系才开始被研究认识。目前多数研究认为肺动脉高压病人伴随有血浆5-HT水平升高，并且5-HT可以引起肺血管收缩和肺动脉平滑肌细胞增殖，但机制未完全明确。 细胞内钙离子增高在促进血管收缩、血管张力增加、细胞增殖等方面起重要作用。细胞处于增殖状态时，细胞内钙离子水平增高。钙库操纵的钙通道（SOCC）是介导细胞内钙离子增高的一类重要通道，SOCC开放后引起钙库操纵的钙内流（SOCE），导致细胞内持续性的钙离子增高。SOCC的分子组成不十分明确，目前普遍认为TRPC通道可能是SOCC的组成成分。内皮素、血小板衍生生长因子、5-HT等多种血管活性物质和生长因子可引起细胞内钙离子增高，促进平滑肌细胞增殖。 结合上述研究背景，推测5-HT作用途径和TRPC通道之间可能存在相互联系，在PAH发生过程中发挥作用。本研究在体外培养的人肺动脉平滑肌细胞中观察了5-HT作用途径对细胞增殖及钙离子相关的下游信号通路的作用，并观察了该过程中TRPC通道所起的作用。通过上述体外实验以期对PAH时5-HT作用途径和TRPC通道之间可能存在的相互联系进行初步了解。 Material and Methods Results TRPC通道抑制剂可以抑制5-HT促进肺动脉平滑肌细胞增殖 MTT结果显示，5-HT2A受体激动剂（DOI）干预组和5-HT干预组的吸光度值比对照组增加，有统计学差异，提示DOI和5-HT促进PASMC增殖。TRPC通道抑制剂（SKF96365）作用后与DOI和5-HT组相比吸光度值降低，提示SKF96365抑制PASMC增殖。5-HT2A受体拮抗剂（ketanserin）作用后与5-HT组相比吸光度值降低，提示ketanserin抑制PASMC增殖（图3-1）。 图3-1 各干预组MTT结果 A：SKF96365对DOI干预时MTT结果的影响；B：SKF96365对5-HT干预时MTT结果的影响；C：Ketanserin对5-HT干预时MTT结果的影响。* P 0.05，vs. Control组；# P 0.05，vs. DOI组或5-HT组，n=6 表3-1 SKF96365对DOI干预时MTT结果的影响 Control DOI DOI+SKF96365 OD value 0.081±0.019 0.122±0.016* 0.060±0.035# * P 0.05，vs. Control组；# P 0.05，vs. DOI组 表3-2 SKF96365对5-HT干预时MTT结果的影响 Ccontrol 5-HT 5-HT+SKF96365 OD value 0.081±0.019 0.142±0.030* 0.059±0.033# * P 0.05，vs. Control组；# P 0.05，vs. 5-HT组 表3-3 Ketanserin对5-HT干预时MTT结果的影响 Control 5-HT 5-HT+Ketanserin OD value 0.081±0.019 0.142±0.030* 0.080±0.026# * P 0.05，vs. Control组；# P 0.05，vs. 5-HT组 细胞周期中G2/M期和S期细胞的和代表处于增殖期的细胞数量。本研究发现与对照组相比，DOI和5-HT都可增加G2/M+S期细胞的百分比，即促进PASMC增殖。SKF96365干预后与DOI和5-HT组相比，G2/M+S期百分比降低，说明SKF96365减弱了DOI和5-HT升高G2/M+S期百分比的作用，表明SKF96365可抑制DOI和5-HT促进PASMC增殖的作用。Ketanserin干预后与5-HT组相比，G2/M+S期百分比降低，说明ketanserin减弱