效价测定的基本方法.PPTVIP

（一）热原检查法 动物：家兔，健康合格，体重1.7kg以上 体温：38. 0 ~39. 6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0. 4℃的家兔 结果判断： ＜0.6℃ 总和＜1.3℃ （一）热原检查法 热原检查限值的确定 一般为人用每公斤体重每小时最大供试品剂量的3～5倍 供试品注射体积每公斤体重一般不少于0.5mL，不超过10mL 限值剂量应不影响正常体温 （二）细菌内毒素检查法 细菌内毒素检查法的分类 ①定性法： 凝胶法 ②半定量法：凝胶半定量试验 ③定量法：光度测定法 浊度法 （终点浊度法、动态浊度法） 显色基质法（终点显色法、动态显色法） （二）细菌内毒素检查法 确定内毒素限值 L=K/M L为供试品的细菌内毒素限值 M为人用每公斤体重或每平方米每小时的临床最大用药剂量 注射剂K=5EU/（kg·h） 放射性药品注射剂K=2.5EU/（kg·h） 鞘内用注射剂K=0.2EU/（kg·h） K=194EU/（m2·h） （二）细菌内毒素检查法 干扰试验 新药的内毒素检查试验前 建立内毒素检查法时 鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验 （二）细菌内毒素检查法 凝胶法 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法 （二）细菌内毒素检查法 光度测定法 浊度法 利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法 终点浊度法 动态浊度法 （二）细菌内毒素检查法 光度测定法 显色基质法 利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的方法 终点显色法 动态显色法 （三）异常毒性检查法 本法系给予小鼠一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察小鼠出现的死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法 （三）异常毒性检查法 小鼠，体重17～20g，5只分别给予供试品溶液0.5ml 结果判断 全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡 （三）异常毒性检查法 限值确定 急性毒性数据（LD50或LD1） 限值至少应小于LD1可信限下限的1/3 （建议采用1/3～1/6） 静脉注射最大剂量0.8ml/20g仍未见毒性反应或死亡，可以此作为检查限值 （四）溶血与凝聚检查法 本法系将一定量供试品与2%的家兔红细胞混悬液混合，温育一定时间后，观察其对红细胞状态是否产生影响的一种方法 （四）溶血与凝聚检查法 结果判断 当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生，若供试品管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，判定供试品符合规定；若供试品管的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，判供试品不符合规定 （四）溶血与凝聚检查法 限值 一般对注射剂原液和稀释液进行溶血与凝聚实验研究 一般应高于临床最大使用浓度 （五）过敏反应检查法 本法系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体内，间隔一定时间后静脉注射供试品溶液进行激发，观察动物出现过敏反应的情况，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应 （五）过敏反应检查法 检查法 豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供试品溶液0.5ml，共3次，进行致敏 均分为2组，每组3只，分别在首次注射后第14日和第21日，由静脉注射供试品溶液1ml进行攻击 （五）过敏反应检查法 结果判断 静脉注射供试品溶液30分钟内，不得出现过敏反应。如有竖毛、发抖、干呕、连续喷嚏3声、连续咳嗽3声、紫疳和呼吸困难等现象中的2种或2种以上，或出现二便失禁、步态不稳或倒地、抽搐、休克、死亡现象之一者，判供试品不符合规定 （五）过敏反应检查法 限值确定 测定供试品对豚鼠腹腔（或皮下）和静脉给药的无毒性反应剂量 在首次给药后14、21、28天中选择最佳激发时间 致敏和激发剂量应小于该途径的急性毒性反应剂量, 适当参考临床剂量 一般激发剂量大于致敏剂量  （六）降压物质检查法 本法系比较组胺对照品（S）与供试品（T） 引起麻醉猫血压下降的程度，以判定供试品 中所含降压物质的限度是否符合规定 （六）降压物质检查法 方法： 体重2kg以上的猫 供试品按一定注射速度静脉注射不同剂量，观察供试品对猫血压反应的剂量反应关系 （六）降压物质检查法 结果判断 dT反应平均值不大于ds反应平均值，并且dT反应平均值任何一次反应值不大于组胺高剂量反应值，即判定供试品降压物质检查符合规定 （六）降压物质检查法 限值和要求 供试品与对照品注射体积应相同，通常为0.1～1ml/kg 临床单次用药剂量的1/5～5倍作为降压反应物质检查剂量限值 如供试品有一定降压