Rpfan37在刺槐共生结瘤过程中的功能探究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１８，３８（５）：４７５５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ Ｒｐｆａｎ３７在刺槐共生结瘤过程中的 功能探究 １，２ ２ 冯　昭 　丑敏霞 （１陕西中医药大学医学技术学院　咸阳　７１２０４６　２西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室　杨陵　７１２１００） 摘要　目的：研究刺槐中与磷脂酰肌醇转运蛋白有较高同源性的基因Ｒｐｆａｎ３７的功能，为探究相 关基因参与豆科植物与根瘤菌共生结瘤过程提供新的思路。方法：通过前期研究，建立豆科植物 刺槐与共生根瘤菌互作的抑制差减杂交反交文库，筛选疑似与共生结瘤相关的基因。利用ＰＣＲ 技术快速克隆经实时荧光定量ＰＣＲ技术（ｑＲＴＰＣＲ）分析基因在不同接菌时间及不同植物组织的 表达。构建ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）重组载体，转农杆菌介导转化植物根部，接种根瘤菌后验证该基因 在刺槐共生结瘤过程的功能。结果：基因表达分析显示，在接菌与未接菌的刺槐根中，处理后第 １５天，Ｒｐｆａｎ３７表达均显著上调，但接菌与未接菌处理对该基因表达无显著影响；在成熟的根瘤 中，该基因仅为低水平表达。ＲＮＡｉ转化植株的鲜重、株高、根长及结瘤数较对照组显著降低。在 显微镜下观察到ＲＮＡｉ植株根毛发育异常；与对照相比，ＲＮＡｉ转化植株形成的根毛卷曲、根毛侵 染线及根瘤原基数目均显著降低。根瘤石蜡切片结果显示ＲＮＡｉ植株根瘤中的侵染细胞与对照 相比明显减少，分析豆血红蛋白表达发现，ＲＮＡｉ植株中根瘤发育成熟过程明显受阻。结论：在豆 科植物刺槐中发现的相关基因Ｒｐｆａｎ３７能够参与刺槐共生结瘤过程，为研究磷脂酰肌醇转运蛋白 在共生结瘤过程中的作用提供了新的理论基础。 关键词　Ｒｐｆａｎ３７　共生结瘤　ＲＮＡ干扰　磷脂酰肌醇转运蛋白　刺槐 中图分类号　Ｑ９４５ 　　根瘤菌侵染豆科植物的根部，能够在根部形成特 内向营养器官转运，一旦获得适宜的微生态环境即可 化的器官———根瘤。在根瘤中，根瘤菌分化成类菌体， 生长繁殖［９］。根瘤菌经由根毛入侵后６～８ｈ，根毛根尖 在固氮酶复合物的作用下，将氮还原成氨的过程称为 开始发生变形卷曲，将一部分已经开始分化的根瘤菌 “共生固氮”作用。豆科植物与根瘤菌共生固氮作用是 嵌入根尖［１０１１］，引起植物细胞壁局部水解，细胞质膜向 最为重要的生物固氮共生关系之一，每年产生近２０亿 内生长，同时新的细胞壁物质沉积在内陷的质膜处，形 ［１２］ ［１２］ 吨的氮肥 。 成了管状侵染线 。侵染线到达由ＮＦｓ诱导产生的根 　　植物根瘤的形成起始于宿主植物根部释放到根际 瘤原基后，通过类似于内吞作用的过程，根瘤菌被植物 的酚类和类黄酮复合物，这些物质的分泌可诱导根瘤 衍生的膜包裹，形成共生体，根瘤原基逐渐发育成根 ［３］ 瘤。因此植物根毛根尖的正常发育是植物根瘤形成的 菌进入植物根部并激活根瘤菌Ｎｏｄ基因表达 ，合成 专一性脂壳寡糖的结瘤因子（ＮＦｓ），并激活宿主响 基础。 ［４７］ 　　近年来，人们对共生结瘤过程的研究已经取得了 应 。由于根毛根尖相对较少交联的细胞壁，使得根 ［８］ 显著进展，许多结瘤相关基因从不同的豆科植物中被 瘤菌更加容易由此侵入 。固氮菌能够在宿主植物体 分离筛选得到，其中很多基因的功能得以阐明，如日本 收稿日期：２０１８０２０２　　修回日期：