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P/O比 NADH主路：P/O = 3ATP（2.5）； FADH2支路：P/O = 2ATP（1.5）； 抗氰支路：P/O = 1ATP。 三、偶联机理 化学偶联假说（1953年Slater） 认为电子传递过程中需要一高能中间物将能量转移到ATP，但一直未能够找到此类物质，后来科学家本人也承认该学说“几乎肯定是不正确的” 。 构象偶联假说（1964年Paul） 该学说认为电子传递的结果使线粒体内膜蛋白质由低能构象转变成高能构象，后者将能量传递给ATP合成酶合成ATP。目前支持该假说的实验较少，可能的证据为线粒体超微结构的研究 。 化学渗透假说（1961年Peter） 该学说认为线粒体内膜是一层结构紧密的膜，膜两侧的物质不能自由穿过。线粒体内部产生的H+由电子传递体向膜外运输，这导致膜外侧[H+]升高，电位差增加，两者共同构成电化学势，电化学势推动[H+]经ATP合成酶的通道向膜内运送，使ATP合成酶合成ATP，将电化学势转变为化学能贮存在ATP中。由于此贡献Peter获得了1978年的Nobel化学奖。 相关证据：①未发现任何一介于电子传递和ATP形成的高能中间物； ② H+、Cl－、K+、OH －不能自由通过线体内膜；③ 破坏H+梯度不能产生ATP；④需要完整的线粒体内膜才能产生ATP 。 Racker重组实验 膜囊泡专门催化电子传递； 可溶性蛋白专门催化ATP的合成。 亚线粒体泡 F1：头部，合成ATP的催化部位 。 ?、?亚基：ADP和ATP结合位点; ?亚基：催化基团； ?亚基：调节质子从Fo向F1的流动。 Fo：基底部疏水蛋白含4个亚基，质子通道。脂溶性羧基试剂二环己基碳二亚胺（DCCD）可抑制质子通过Fo。 柄部：含寡霉素敏感蛋白 OSCP，调节质子流。 （FoF1-ATPase，复合体Ⅴ ） ATP合成酶 四、解偶联和抑制 解偶联剂：使电子传递与ADP磷酸化过程分离。它只会抑制ATP的生成；并不抑制电子传递过程，而将电子传递所产生的自由能以热形式散失。 e.g.双羟香豆素、三氯甲氧基苯腙羰基氰化物（FCCP）。 解偶联剂只抑制电子传递链磷酸化，不影响底物水平磷酸化。 2，4-二硝基苯酚在pH7时以解离形式存在，不能穿过线粒体膜；酸性时以非解离形式存在，易于穿过线粒体膜，可将一个质子带入膜内基质，破坏电子传递形成的跨膜质子梯度。 氧化磷酸化抑制剂：抑制氧的利用及ATP的形成，但不直接抑制电子传递链上载体的作用（这一点和电子传递抑制剂不同，而是直接干扰ATP的生成过程）。 因其干扰由电子传递的高能状态形成ATP的过程，也使得电子传递不能进行。e.g. 寡霉素可与F1-Fo结合抑制氢离子内流，从而抑制氧的利用。 离子载体抑制剂：生物膜上的一类脂溶性物质，可与某些离子结合，并作为它们的载体使这些离子能够穿过内膜，从而破坏跨膜两侧的电位梯度，最终破坏氧化磷酸化。e.g. 缬氨霉素（K+）；短杆菌肽（K+，Na+）。 五、腺苷酸的转运 线粒体内膜上的腺苷酸载体为一种高度选择性的传递蛋白，可负责ADP和ATP双向运输，又称ADP/ATP交换体。面向外侧时结合位点对ADP亲和力高，面向内侧时结合位点对ATP亲和力高。 六、线粒体穿梭系统 3-磷酸甘油穿梭系统（动物肌细胞、大脑） 因此胞液中NADH上的电子通过甘油磷酸穿梭途径转运后生成的ATP不是2.5而是1.5。其生物学意义在于使胞液中的NADH逆浓度梯度转运到线粒体内膜进入呼吸链氧化。 苹果酸穿梭系统（动物心脏、肝、肾） 苹果酸-α-酮 戊二酸载体 谷氨酸-天冬 氨酸载体 七、能荷 能量载荷，简称能荷，指总腺苷酸库中（ATP、ADP和AMP浓度之和）高能磷酸基（ATP）所占比例。 高能荷时抑制ATP生成，促进ATP利用。低能荷时抑制ATP利用，促进ATP生成。 能荷调节靠ATP、ADP、AMP对代谢中酶的变构调节实现的。 细胞内能荷一般在0.8~0.9。 练一练 在底物和氧存在的条件下，根据下表三种不同抑制剂阻断呼吸链作用时产生的氧化状态，确定各电子传递载体在呼吸链中的顺序。 第四章 生物氧化  第一节 概述 一、生物氧化 生物氧化（biological oxidation）指有机物在细胞内氧化分解，最终生成CO2 和 H2O并释放出能量的过程，又称为细胞氧化（cellular oxidation）、细胞呼吸或组织呼吸（tissue respiration）。 二、生物氧化的特点 只能在活细胞内温和条件下进行； 在酶、辅酶和中间传递体参与下进行； 能量逐步释放，以高能磷酸化合物（以ATP为主）形式贮存； 反应场所：真核生物在线粒体上进行，原核生物在细胞膜上进行。 产物生成：CO2脱羧而来，H2O是电