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《抗人球蛋白实验》课件.ppt 12页

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抗人球蛋白实验 概述 抗人球蛋白实验(AGT),又称Coombs试验,是不完全抗体的一种很好方法。抗人球蛋白是用人血清免疫家兔,产生的抗人球蛋白抗体,即抗人球蛋白血清。可检测体内致敏的RBC(直接抗人球蛋白实验)和体外致敏的RBC(间接抗人球蛋白试验)。 实验原理 直接抗人球蛋白试验是用抗球蛋白试剂直接和待检RBC进行反应,目的是检测RBC上是否存在免疫球蛋白,该试验是免疫血液学最长用的试验之一。大多免疫抗体为IgG类,分子量小,与RBC相应抗原结合后,在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应,称为不完全抗体。但在抗-IgG(抗人球蛋白抗体)参与下,通过抗人球蛋白的桥连作用,可使RBC与相应抗体(IgG)反应出现肉眼可见的凝集。 仪器及用具:小试管、吸管、离心机、37℃水浴箱、显微镜、冰箱等。 试剂 (1)抗球蛋白试剂。 抗球蛋白试剂通常有三种:多特异性抗球蛋白试剂(简称:多抗,在直抗试验中常常作为初筛试剂使用)、单特异性抗-IgG试剂(简称:抗-IgG)和单特异性抗-C3试剂(简称:抗- C3)。多抗包括了抗-IgG和抗- C3两种成分,在直抗试验中一旦出现阳性结果,通常需要单抗-IgG和抗- C3进一步分析。 (2)致敏对照RBC:取3人O型RBC混合用生理盐水洗涤,上清液倒尽后取压积RBC加等量抗-D血清,置37℃水浴箱致敏1h,取出后生理盐水洗涤3次,末次洗涤后降上层盐水倒尽,配成5%RBC盐水悬液,供阳性对照。 (3)未致敏的对照RBC:除不用抗-D血清致敏外,其余按上述配制,供阴性对照。 标本 取受检者RBC以生理盐水洗涤3次,末次洗涤后降上层盐水倒尽,配成5%RBC盐水悬液。 操作 (1)取3只小试管分别标记(受检、阳性对照、阴性对照),3只试管分别加入受检者5%RBC盐水悬液、致敏的5%“D” 阳性RBC盐水悬液、5%“D” 阴性RBC盐水悬液各一滴,再加入抗球蛋白血清1滴,混匀。 (2)以1000rpm离心试管,轻轻混合,观察结果。 结果判定 如阳性对照凝集,阴性对照不凝集,受检RBC凝集者直接抗球蛋白试验为阳性,不凝集者为阴性。 质量控制 (1)未洗涤的RBC或悬浮血浆中细胞及用酶处理过的RBC不能用于检测。 (2)所有结果应在检测结束时立即判断,并熟练掌握其判断标准,结果观察过迟、重悬浮过度均可产生假阴性。 (3)离心时间和速度应根据阳性对照反应程度适当调整,不适的离心和温育都会产生假阴性。 * * ? ■ ? ? ? * ? ■ ? ? ? * ? ■ ? ? ? * ? ■ ? ? ? * * * * ? ■ ? ? ? * ? ■ ? ? ? *

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