乙肝病毒诱导IIA型磷脂酶A2表达分子机制研究.docxVIP

1.1 研究意义 原发性肝癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高、生存期短。我国是世界上HCC死亡率最高的国家，占世界上肝癌总死亡人数的53%。全球每年新患肝癌患者中约55％发生在我国，约有30多万人被诊断为HCC，且肝癌发病率和死亡率有逐年升高的趋势，因此，我国的肝癌诊治形势十分严峻?[1-3]。 目前乙肝病毒（HBV）是公认的HCC主要诱因之一，HBV感染机体后能够引发慢性乙型肝炎（CHB），最终发展成为肝纤维化（LC）和HCC。HBV编码的病毒蛋白在诱发肝癌形成过程中发挥了至关重要的作用，然而其分子机制不明。HBV编码病毒蛋白如何调控宿主基因的表达并在HBV致HCC中发挥的作用是目前研究的核心问题[4,5]。因此，揭示在HBV致HCC中发挥关键作用的因子，并探讨HBV病毒蛋白调控其表达的分子机制，将可能为HBV相关HCC治疗提供有效的干预靶点。 在前期研究中，我们采用基因芯片筛选了整合HBV全基因组的HepG2.2.15细胞及其对照细胞HepG2的差异表达基因，发现IIA型磷脂酶A2（PLA2G2A）的表达水平在HepG2.2.15细胞显著升高，并且采用RT- PCR和?western blot对芯片结果进行了验证，血清学检测结果显示慢性乙肝患者PLA2G2A血清学水平较健康对照高。同时,?证实了PLA2G2A能够促进HBV的复制（见工作基础）。由于PLA2G2A在肿瘤多种恶性生物学表型调控（增殖、恶性转化、血管生成、侵袭等）中发挥重要作用[6]，我们进一步采用基因芯片筛选了HBV相关肝癌组织及癌旁组织中差异表达基因，发现PLA2G2A?的表达在癌组织显著上调；临床标本检测结果显示HBV相关肝癌组织中?PLA2G2A表达较相应癌旁组织高。然而，HBV是通过哪个病毒蛋白调控PLA2G2A的表达？其调节的信号通路如何？PLA2G2A又如何参与HBV相关肝癌的发生和发展？目前国内外还没有相关报道。本研究将阐明HBV病毒蛋白在转录水平调控PLA2G2A表达的分子机制及PLA2G2A对 HBV致 HCC形成及其恶性表型的影响。研究结果不仅有助于完善HBV调控宿主信号网络分子机理，同时为肝癌的临床诊断、潜在的分子靶向治疗及预后判断提供新的思路。 1.2国内外研究现状及发展动态分析 1.2.1 HBV是导致 HCC形成的最主要因素 全球超过20亿人感染HBV，每年估计有32万人死于HBV相关疾病，大约有30-50%的HBV死于HCC[7,8]。临床研究表明：慢性HBV感染者的HCC发病危险性要比无HBV感染的普通人群高出 200倍[9]。我国肝癌病例 80%以上是慢性乙肝患者。由此可见：HBV感染是引起HCC肝癌高发病率的主要危险因素。HBV病毒感染导致HCC 的发生是一个多因素、多阶段的复杂过程，主要包括宿主和病毒两方面的因素。如下图所示。 HBV感染诱发HCC的可能机理（Nat Rev Cancer.?2006 Sep;6(9):674-687） 1.2.2 HBV编码病毒蛋白在肝癌形成中的作用 已知 HBV 基因组包含四个开放阅读框（ORF），编码七个病毒蛋白，包括：包膜蛋白基因（preS1/HBx/S-ORF）编码的三个表面抗原（preS1,HBx,HBs）；衣壳蛋白基因（preC/C-ORF）编码的核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg）；聚合酶基因（P-ORF）编码的带有反转录酶功能的聚合酶蛋白（HBp）；由 X基因（X-ORF）编码的 X蛋白（HBx）[10]。 HBV编码的病毒蛋白在肝癌的形成过程中发挥着重要作用。Chisari FV 和Hildt? E通过HBx、HBs转基因小鼠，发现在20个月内自发形成 HCC，充分证明了病毒蛋白在 HCC形成中的重要作用[11,12]；由于HBV转基因鼠天然免疫耐受，在不经历慢性炎症的情况下自发形成HCC，首次提出了HBV编码病毒蛋白能直接诱导HCC形成的假说[13,14]。HBx通过激活细胞生长信号通路，如 Wnt/beta-catenin 和 Ras/Raf/MAPK，促进肝细胞恶性转化和增殖[15]；HBs 及其截短体蛋白在内质网堆积，导致内质网应激反应过度，形成氧自由基，致使基因组 DNA 不稳定，从而促进肝癌的形成[16]；HBc 通过抵抗 TRAIL诱导的肝细胞凋亡，促进肝细胞增殖[17]。 目前为止，HBV致HCC的机制还不是很清楚。因此，阐明HBV编码病毒蛋白如何调控宿主基因的表达及其在致HCC中发挥的作用将对于揭示HBV的致癌机理有着重要意义，同时也将为HCC的治疗提供新的干预靶点。 1.2.3 IIA型磷脂酶A2的研究进展 磷脂酶A2（PLA2）是一大的酶类，能催化水解磷脂Sn-2位脂键，产生自由脂肪酸和溶血磷脂，在脂类代谢及合成多种生物活