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第二章微生物的纯培养和显微技术微生物的分离和纯培养显微镜和显微技术显微镜下的微生物 “微生物”并非分类学上的名词，是形体微小（0.1mm)、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚至无细胞结构的低等生物的通称。微生物有五大共性：体积小、比表面积大 吸收多、转化快 生长旺、繁殖快 适应强、易变异 分布广、种类多 1. 体积小、面积大比面=面积/体积乳酸杆菌 120,000豌豆 6.0鸡蛋 1.5体重200磅的人 0.32 吸收多，转化快3 生长旺，繁殖快★例如：Escherichia coli (大肠杆菌)在最适的生长条件下，每12.5~20分钟细胞就能分裂一次。★在液体培养基中，细菌细胞的浓度一般为108~109个/ml。★谷氨酸短杆菌：摇瓶种子→50吨发酵罐：52小时内细胞数目可增加３２亿倍。★利用微生物的这一特性就可以:实现发酵工业的短周期、高效率生产。例如生产鲜酵母时，几乎12小时就可以收获一次，每年可以收获数百次。4.种类多、分布广5.易变异、适应强★任何有其它生物生存的环境中，都能找到微生物。而在其它生物不可能生存的极端环境中也有微生物存在。微生物的基本特点：小！ 微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能通过显微镜才能进行观察和研究。微生物的基本特点：小！ 在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性； 微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存；培养技术在微生物学中具有重要意义！在研究中所使用的微生物培养群体：培养物：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物的培养物；纯培养物： 只有一种微生物的培养物；通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果纯培养技术是进行微生物学研究的基础！第一节 微生物的分离和纯培养 从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。一、无菌技术 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；彻底杀灭灭菌杀灭部分杀灭消毒控制病害抑制酶腐微生物防腐抑制抑制宿主体内的病原微生物化疗灭菌（sterilization）：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。消毒（disinfection）：采用较温和的理化因素仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。防腐（antisepsis）：利用某种理化因素完全一直霉腐微生物的生长繁殖，从而防止食品等发生霉腐的措施。化疗(chemotherapy): 利用高选择毒力的化学物质来一直宿主体内病原微生物的生长繁殖，借以达到治疗该传染病的一种措施。1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：试管、瓶子、培养皿等1887年，R J Petri 发明 Petri dish1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：试管、瓶子、培养皿等高压蒸汽灭菌常用的灭菌方法：高温干热灭菌2、接种操作无菌操作：火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行2、接种操作无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行二、用固体培养基分离纯培养液体培养基；固体培养基；半固体培养基；培养基：二、用固体培养基分离纯培养液体培养基；固体培养基；半固体培养基；培养基：琼脂柯赫（Robert Koch）的助手W Heese和他的夫人Fran Heese二、用固体培养基分离纯培养菌落（colony）： 单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体众多菌落连成一片菌苔（lawn）不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据（见P14 图2-3）。（P6 图 2-3）同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落二、用固体培养基分离纯培养使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：稀释！二、用固体培养基分离纯培养2、涂布平板法使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！1、稀释倒平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！二、用固体培养基分离纯培养3、平板划线法二、用固体培养基分离纯培养3、平板划线法3、平板划线法二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离厌氧