使用UPLC评价增加柱前系统体积对含有高有机相稀释剂的-Waters.PDF

使用UPLC评估增加柱前系统体积对含有高有机相稀释剂的样品峰形的影响 1 2 2 2 Chris Henry 、Paul Rainville 、Pat McConville 和Paula Hong 1沃特世公司(英国威姆斯洛) 2沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 简介 在ACQUITY™ UPLC™ H-Class系统上使用高有 理想情况下，在运行色谱方法时，样品稀释剂组分应尽可能接近方法起始条件。 机相溶剂作为稀释剂成功运行了药典方法，且 这样做的目的是最大程度减小由样品溶剂效应引起的谱带展宽和峰畸变，进而 未发生峰畸变。 避免出现峰不对称性、峰分裂或数据不可用的情况。 引起溶剂效应的原因是稀释剂与流动相之间存在洗脱强度差异。当稀释剂的洗 1-2 脱强度高于流动相时，峰展宽和峰形异常的情况通常会更加严重 。 事实上，业内普遍认为，最好是将进样的样品溶解于起始流动相中。然而，给定 样品的预处理常常需要将分析物溶解在与流动相组分相差很大的溶剂中。为了 避免溶解度问题和峰形不佳的问题，许多方案都要求在预处理过程中挥干样品 溶剂，然后将样品复溶于流动相中。然而，这个额外的步骤非常耗时，所需时间 1 往往比HPLC分析的时间还要长。 一般而言，推荐的做法是避免使用比流动相更强的溶剂来溶解样品和标准品。 这种做法基于如下假设：强于流动相的进样溶剂会干扰样品在柱头处的吸附，而 采用大体积进样时尤其如此2。遗憾的是，这种做法在实践中可行性不佳，因为分 析人员往往必须根据样品的溶解度来决定有机溶剂的含量，以确保样品能够完 全溶解。 对于扩散体积较大的传统LC系统，这种现象带来的问题较少，因为柱前样品/溶 剂/流动相混合很充分，可以缓解溶剂效应造成的色谱峰问题。 然而，对于现代的低分散U(H)PLC系统，如果以较大体积进样含有高有机相的 样品，就会出现问题，并可能导致峰对称性变差或峰分裂。 沃特世解决方案 配备光电二极管阵列检测器的ACQUITY UPLC H-Class系统 Empower™ 3软件 关键词 USP，药典方法，UPLC，HPLC，Empower，监 管，峰对称性 1 [ APPLICATION NOTE ][ APPLICATION NOTE ]