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中华补血草ISSR-PCR体系的构建与正交优化-南京师范大学学报
35 3 ( ) Vol． 35 No． 3
第 卷第 期 南京师大学报 自然科学版
2012 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (Natural Science Edition)
年 月 Sept ，20 12
中华补血草ISSR-PCR 体系的构建与正交优化
1 2 2 1 1
， ， ， ，
丁 鸽 张代臻 于延球 赵玲玲 张蓓蓓
(1． ， 224003)
盐城工学院化学与生物工程学院 江苏盐城
(2 ． ， ， 224002)
江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室 盐城师范学院 江苏盐城
［ ］ ISSR ， ， ISSR 、Mg2 +
摘要 为获得中华补血草 的最佳反应体系 采用正交试验设计 对影响 反应的模板含量 浓
、dNTP 、Taq 、 ． ，
度 浓度 酶浓度 扩增程序及退火温度等多种因子进行优化筛选 通过各因子的组合研究 分析非特
异性条带的产生原因并进行条件优化， ISSR － PCR :25 L
建立了可用于中华补血 分析的稳定可靠的反应体系 μ
PCR ，10 × Buffer 2. 5 L ，2 mmol / L MgCl ，dNTP 100 mol / L ， DNA 20 ng ，Taq 1. 5 U ，
反应体积 μ 2 μ 模板 为 聚合酶 随机
0. 4 mol / L ， 52℃ ～ 58℃ ． ISSR 、 、
引物 μ 退火温度 所建立的中华补血草 反应体系具有标记位点清晰 反应系统稳定
、 ， ．
检测多态性能力较强 重复性好等特点 可以较好地应用于中华补血草的遗传多
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