食用油脂中辣椒素的测定-中国食品机械设备网.DOC

—— PAGE \* MERGEFORMAT6 — — PAGE \* MERGEFORMAT7 —— 附件 食用油脂中辣椒素的测定 BJS 201801 范围 本方法规定了食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的测定。 原理 试样经二氯甲烷溶解，氢氧化钠水溶液提取酸化后，过固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。 试剂和材料 除另行规定外，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 3.1.3 甲酸（CH2O2）：质谱级。 3.1.4 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。 3.1.5 氢氧化钠（NaOH）：分析纯。 3.1.6 浓硫酸（H2SO4）：98%，分析纯。 3.2 溶液配制 3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸（3.1.3）1 mL用水定容至1000 mL，用滤膜（0.22 μm，水相）过滤后备用。 3.2.2 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（3.1.3）1 mL用乙腈（3.1.1）定容至1000 mL,用滤膜（0.22 μm，有机相）过滤后备用。 3.2.3 2%氢氧化钠溶液：称取20 g 氢氧化钠（3.1.5）溶于1000 mL水中，摇匀备用。 3.2.4 稀硫酸（1+15）溶液：取10 mL浓硫酸（3.1.6）缓缓倒入150 mL水中，搅拌均匀备用。 3.3 标准品 天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液：分别称取天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品（3.3）0.1 g（精确至0.000 1 g），用甲醇（3.1.2）溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为1 mg/mL。贮存于4 ℃冰箱中，有效期3个月。 3.4.2 混合标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液（3.4.1）适量于容量瓶中，用甲醇（3.1.2）将其稀释成含量分别为0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL的标准系列混合工作液。临用时配制。 3.5 C18 固相萃取（SPE）小柱：1000 mg，6 mL，或等效SPE柱。 仪器和设备 4.1 高效液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源。 4.2 超声波清洗器。 4.3 分析天平：感量为0.000 1 g。 4.4 离心机：转速≥4000 r/min。 4.5 涡旋混合器。 分析步骤 5.1 试样制备 准确称取1 g（精确至0.000 1 g）样品于10 mL具塞塑料试管中，加入1 mL二氯甲烷（3.1.4），再加入3 mL 2%氢氧化钠溶液（3.2.3），涡旋提取10 min，4000 r/min离心10 min，取上层水相；残留有机相再用3 mL 2%氢氧化钠溶液重复提取一次，合并水相，再用稀硫酸溶液（3.2.4）调节pH至2-3之间后进行固相萃取操作。C18 SPE小柱预先用3 mL乙腈淋洗3次，再用3 mL纯水淋洗2次进行活化，然后将调节完pH值的水相提取液加入小柱，控制流速至每秒1-2滴，待全部溶液通过SPE小柱后，以3 mL超纯水淋洗2次，弃去流出液，最终以3 mL乙腈（3.1.1）洗脱2次。乙腈洗脱液50℃氮吹近干，用0.5 mL甲醇（3.1.2）溶解后过微孔滤膜（0.22 μm，有机相），过滤液置于进样小瓶内衬管中供LC-MS/MS测定。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱条件 a）色谱柱：C18柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当者； b）流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B为0.1%甲酸乙腈溶液（3.2.2），洗脱梯度见表1； c）流速：0.3 mL/min； d）柱温：40 ℃； e）进样量：2 μL。 表1 洗脱梯度 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 85 15 1 85 15 2 10 90 5 10 90 5.1 85 15 6 85 15 5.2.2 质谱条件 a）电离方式：电喷雾正离子模式； b）检测方式：多反应监测（MRM）； c）雾化气压力：30 psi； d）离子喷雾电压：4000 V； e）干燥气温度：500 ℃； f）干燥气流速：8 L/min； g）定性离子、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表2。 表2 辣椒素的定性离子、定量离子、去簇电压和碰撞能量 中文名称 母离子 （m/