酶反应最快酶活1＞2＞4＞35不同调pH方法的影响天冬酰胺酶不同.PPTVIP

* * 第二节 发酵过程的pH控制 pH是微生物代谢的综合反映，又影响代谢的进行，所以是十分重要的参数。 发酵过程中pH是不断变化的，通过观察pH变化规律可以了解发酵的正常与否 一、发酵过程pH变化的原因 1、基质代谢 （1）糖代谢 特别是快速利用的糖，分解成小分子酸、醇，使pH下降。糖缺乏，pH上升，是补料的标志之一 （2）氮代谢 当氨基酸中的-NH2被利用后pH会下降；尿素被分解成NH3，pH上升，NH3利用后pH下降，当碳源不足时氮源当碳源利用pH上升。 （3）生理酸碱性物质利用后pH会上升或下降 2、产物形成 某些产物本身呈酸性或碱性，使发酵液pH变化。如有机酸类产生使pH下降，红霉素、洁霉素、螺旋霉素等抗生素呈碱性，使pH上升。 3、菌体自溶，pH上升，发酵后期，pH上升。 二、pH对发酵的影响 例 pH对林可霉素发酵的影响 林可霉素发酵开始，葡萄糖转化为有机酸类中间产物，发酵液pH下降，待有机酸被生产菌利用，pH上升。若不及时补糖、(NH4)2SO4或酸，发酵液pH可迅速升到8.0以上，阻碍或抑制某些酶系，使林可霉素增长缓慢，甚至停止。对照罐发酵66小时pH达7.93，以后维持在8.0以上至115小时，菌丝浓度降低，NH2-N升高，发酵不再继续。 发酵15小时左右，pH值可以从消后的6.5左右下降到5.3，调节这一段的pH值至7.0左右，以后自控pH，可提高发酵单位。 ? ? 1、实例 pH 7.0 t 不调pH 调pH 效价 pH 例：培养基初始pH值对漆酶分泌的影响 pH在4～7范围内产酶最高 2、pH对发酵的影响 （1）pH影响酶的活性。当pH值抑制菌体某些酶的活性时使菌的新陈代谢受阻 （2）pH值影响微生物细胞膜所带电荷的改变，从而改变细胞膜的透性，影响微生物对营养物质的吸收及代谢物的排泄，因此影响新陈代谢的进行 （3）pH值影响培养基某些成分和中间代谢物的解离，从而影响微生物对这些物质的利用 （4）pH影响代谢方向 pH不同，往往引起菌体代谢过程不同，使代谢产物的质量和比例发生改变。例如黑曲霉在pH2~3时发酵产生柠檬酸，在pH近中性时，则产生草酸。 谷氨酸发酵，在中性和微碱性条件下积累谷氨酸，在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺 3、pH在微生物培养的不同阶段有不同的影响 生长 合成 pH对菌体生长影响比产物合成影响小 例 青霉素：菌体生长最适pH3.5~6.0,产物合成最适pH7.2~7.4 四环素：菌体生长最适pH6.0~6.8，产物合成最适pH5.8~6.0 X pH 四环素 4、最佳pH的确定 配制不同初始pH的培养基，摇瓶考察发酵情况 pH对产海藻酸裂解酶的影响 pH对海藻糖水解酶产生的影响 pH——菌浓 pH——酶活 pH对谷氨酰胺转氨酶活力的影响 热凝胶产生不同阶段pH的考察 pH DO biomass 从图中可见，热凝胶发酵菌体生长和热凝胶合成是非偶联的，整个发酵过程可以分成两个阶段：前10 h是菌体生长期，之后热凝胶开始合成，至发酵结束是热凝胶合成期。 在菌体生长期，DO 直线下降，培养液中的pH也迅速下降。10 h左右，菌体质量浓度达到最大值，DO 和pH降至最低点（5.4～5.6），菌体生长结束。此后进入热凝胶合成期。 试验两阶段的最适pH，见表 稳定期随着pH降低，糖耗速率增加，生物量增加，但产物合成速率在pH5.6时达到最高。说明当pH小于5.6以后微生物消耗的糖并非用于合成热凝胶，而是合成菌体。 三、pH的控制 1、调节好基础料的pH。基础料中若含有玉米浆，pH呈酸性，必须调节pH。若要控制消后pH在6.0，消前pH往往要调到6.5~6.8 2、在基础料中加入维持pH的物质，如CaCO3 ，或具有缓冲能力的试剂，如磷酸缓冲液等 3、通过补料调节pH 在发酵过程中根据糖氮消耗需要进行补料。在补料与调pH没有矛盾时采用补料调pH 如（1）调节补糖速率，调节空气流量来调节pH (2)当NH2-N低，pH低时补氨水； 当NH2-N低，pH高时补(NH4)2SO4 4、当补料与调pH发生矛盾时，加酸碱调pH 分别在4种缓冲介质中，于pH 6．50一9．50测定天冬酰胺酶酶活力． 1 甘氨酸介质pH 8.00时酶活力最高； 2 硼酸在pH 8．50，酶反应最快 3 磷酸在pH 8．50，酶反应最快 4 Tris在pH 8．50，酶反应最快 酶活1＞2＞4＞3 5、不同调pH方法的影响 天冬酰胺酶 不同pH控制方式对目的突变株ISw330异亮氨酸摇瓶发酵的影响，结果如图所示。 “1”表示只加CaC03控制pH值，“2”表示只加尿素控制，“3”表示CaC03和尿素联合控制