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水稻BRI1启动子克隆和表达载体构建 　　摘要：为探究拟南芥和水稻BRI1基因差异表达的原因，本研究克隆了OsBRI1启动子，并将其构建在植物表达载体pCambia2300-GUS上，为进一步转化拟南芥或其他植物并研究其表达模式奠定了基础。 　　关键词：水稻；油菜素内酯；OsBRI1 　　中图分类号：S511+Q78文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）08-0001-05 　　AbstractIn order to explore the reasons for expression difference of BRI1 in rice and Arabidopsis thaliana， we cloned the OsBRI1 promoter and connected it on the plant expression vector pCambia2300-GUS. These results laid foundations for further transformation into Arabidopsis or other plants and study on its expression patterns. 　　KeywordsRice； Brassinosteroids； OsBRI1 　　植物激素（plant hormone）是植物体内产生的一类在很低浓度时即可对植物的生长发育、代谢、环境应答等生理过程产生重要调控作用的代谢产物，在植物生长过程中扮演着极其重要的角色。植物中最早发现的一类甾醇类激素是芸苔甾内酯（brassinolide， BL）[1]。到目前为止，已发现60多种具BL结构的类似物，广泛存在于植物的不同组织和器官中，由于它们的功能与BL相似，统称为油菜素甾醇类物质（brassinosteroid， BR）[2-4]，BL是油菜素甾醇类成员中生物活性最强的一种分子。随着BR结构鉴定和人工合成BR的出现，科学家们进行了大量的生理学研究，不仅确定了BR在多种植物中的促生长作用，还揭示了BR的多种其它功能，包括种子萌发、气孔形成、维管分化、株型、开花、雄性可育性和抑制衰老等[5]。外施具生物活性的BR能增强植物对各种胁迫的抗性，包括生物和非生物胁迫[6-8]。自20世纪80年代起，BR已被广泛用于增加农作物和蔬菜的产量。在水稻中，BR影响许多农艺性状如粮食产量、株高、叶角、籽粒大小和分蘖数等[9，10]。 　　BR的感知和信号传递过程需要众多基因参与，首先通过一个定位于细胞膜上的富含亮氨酸重复序列（leucine-rich repeats， LRRs）的跨膜类受体蛋白激酶BRI1 （brassinosteroid insensitive 1） 感知传递信号[11，12]，然后才能激活一系列的信号级联传递[13，14]。利用AtBRI1启动子在野生型拟南芥中驱动GUS表达，显示AtBRI1在根、茎、叶柄及叶中广泛表达[15]。采用RT-PCR技术，检测水稻各组织器官中OsBRI1的表达模式，其主要在芽中表达，在根部表达不明显[16]。本文构建了OsBRI1启动子（pOsBRI1）的表达载体，为利用pOsBRI1在野生型拟南芥中驱动GUS报告基因的表达，在同一水平观察水稻和拟南芥BRI1的表达位置及表达量的差异，以及揭示OsBRI1基因的表达特征奠定基础。 　　1材料与方法 　　1.1材料与试剂 　　1.1.1试验材料水稻日本晴基因组DNA。 　　1.1.2菌株和载体大肠杆菌DH5α感受态细胞、pCambia2300-GUS载体质粒由陕西师范大学生命科学学院进化发育实验室保存。克隆载体pMD19-Simple购自宝生物工程（大连）有限公司。 　　1.1.3酶、试剂盒及其他耗材LA Taq酶、Sal Ⅰ、BamHⅠ、T4 DNA Ligase、6×DNA Loading Buffer、DNA Marker、dNTP Mixture 购自宝生物工程（大连）有限公司；KOD FX（附有dNTPs，KOD Buffer） 购自KOD公司；NheⅠ、RNA溶解酶溶液购于NEB公司；EasyPure Quick Gel Extraction Kit、EasyPure Plasmid MiniPrep Kit购自Omiga；其他药品试剂均为进口或国产分析纯。 　　1.1.4引物和测序PCR引物合成及DNA测序工作由南京金斯瑞生物工程股份有限公司完成。 　　1.2试验方法 　　1.2.1引物设计根据TAIR （The Arabidopsis Information Resource）网站上AtBRI1的基因序列，在网站Phytozm中查找水稻日本晴BRI1基因，定义起