建立液相芯片方法检测鉴别结核分枝杆菌复合群鸟分枝杆菌与副结核.PDF

微生物学通报 JUN 20, 2011, 38(6): 908−915 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 简 报 建立液相芯片方法检测鉴别结核分枝杆菌复合群、 鸟分枝杆菌与副结核分枝杆菌 1* 2 1 1 3 1 1 陈茹 毕英佐 刘志玲 周仲芳 刘志辉 陈芳 赵吟 (1. 广东出入境检验检疫局 广东 广州 510623) (2. 华南农业大学 广东 广州 510642) (3. 广州市胸科医院 广东 广州 510095) 摘 要: 运用液相芯片技术原理, 以分枝杆菌菌种(群)特异基因序列 IS6110 、IS1081 、IS1245 和 F57 为目标基因, 设计筛选4 套扩增引物和杂交探针, 建立同时检测鉴别结核分枝杆菌复合群、鸟 分枝杆菌和副结核分枝杆菌的四重液相基因芯片检测方法。对 13 种共54 株分枝杆菌菌株以及23 种常见微生物样品的检测结果显示, 四重液相芯片方法可特异检测鉴别目标菌种(群), 与其它分 枝杆菌菌种或微生物无非特异交叉反应; 检测敏感性达 2.1×101−2.5×102 基因拷贝或 0.06−0.74 fg DNA; 组内检测变异系数和组间检测变异系数均10% 。采用四重液相芯片方法从临床结核疑似人 痰样和牛组织样品中检出结核致病菌, 检出率分别达75.6% (99/131)和94.9% (37/39), 显著高于培 养法(38.9%和 53.8%) 。对副结核疑似临床样品的检测试验结果显示, 四重液相芯片方法与荧光 PCR 方法的阳性符合率为83% (24/29)。对四重混合模板的检测试验结果显示该液相芯片方法可鉴 别不同菌种混合感染。四重液相芯片方法的检测周期1 d, 其中对纯化DNA 模板的检测时间可在 2−3 h 内完成。 关键词: 液相芯片技术, 结核分枝杆菌复合群, 鸟分枝杆菌, 副结核分枝杆菌 Development of a liquidchip assay for simultaneous detection of Mycobacterium tuberculosis complex and M. avium and M. paratuberculosis CHEN Ru1* BI Ying-Zuo2 LIU Zhi-Ling1 ZHOU Zhong-Fang1 LIU Zhi-Hui3 CHEN Fang1 ZHAO Yin1 (1. Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou, Guangdong 510623, China) (2. South China Agriculture University, Guangzhou, Guangdong 510642, China) (3. Guangzhou Chest Hospital, Guangzhou, Guangdong 510095, China) 基金项目：广东出入境检验检疫局科研项