网织红百分数法测定rHuEPO体内生物学活性的研究.PDF

《生物工程进展》2000 ,Vol . 20 ,No . 6 网织红百分数法测定 r Hu EPO 体内生物学活性的研究 贾 　茜 　景 　红 　张卫婷 　谭丽霞 　王 　璐 　贺秉坤 (华北制药集团新药研究开发中心　石家庄 　0500 15) 摘要 　本文通过对网织红百分数法测定 r Hu EPO 体内生物学活性进行研究 ,找出网织红细胞百分 数与 r Hu EPO 浓度线性相关的范围。从而确定了用计数网织红细胞百分数的方法测定 r Hu EPO ( ) 体内生物学活性 。提出在 r Hu EPO 体内生物学活性测定中选择合适的稀释液至关重要 。对 3 ,3 法测定 r Hu EPO 体内生物学活性进行了统计 ,批间 CV 、批内CV 均接近 10 % ,单次实验 FL %平均 ( ) ( ) 数为 3 126 % ,并提出鼠间差异是造成 FL %较大的主要原因;对 3 ,3 法与 2 ,2 法测定 r Hu EPO ( ) ( ) 体内生物学活性进行比较 ,发现 2 ,2 法较 3 ,3 法更适合用于 r Hu EPO 生产过程中 r Hu EPO 体内 生物学活性的测定 。 ( ) ( ) 关键词 　r Hu EPO 体内生物学活性 　网织红细胞 　网织红细胞百分数 　 3 ,3 法 　 2 ,2 法 ( ) 　　前言　红细胞生成素 Ery throp oietin 简称 EPO , 1 　材料与方法 是由肾脏分泌的一种糖蛋白激素 ,成熟 EPO 由 166 个氨基酸组成 ,含 4 个半胱氨酸残基 。EPO 促进干细 1. 1 　试剂与样品 胞分化为原红细胞 ,加速幼红细胞的分裂增殖 ,促进 煌焦油蓝 :SI GMA 网织红细胞的成熟和释放 ,促进血红蛋白的合成[ 1 ,2 ] 。 瑞士色素 : 国产 主要适应症有肾性贫血、难治性贫血、肿瘤并发贫血、 两种染料均按文献[9 ] 方法配制及使用 多发性骨髓瘤 、脊髓发育不良综合症、艾滋病化疗后 EL ISA 试 剂 盒 : Eryt hropoietin QuantikineTM 贫血、风湿性关节炎并发贫血、高山病等[3 ] 。自 1984 IVD TM ( R D) 年首次分离出表达 EPO 的cDNA 后 ,r HuEPO 作为治 严格按试剂盒操作说明操作 ,批间 CV 10 % , 疗肾衰型贫血的特效药而进入医药市场[ 1] 。对 EPO 批内CV 5 % 。 的糖基化研究表明[4 ,5 ] ,EPO 糖链的含量约占EPO 分 r Hu EPO 工 作 标 准 : Recormon 2000 子量的 40 % ,具有高度的不均一性 ,r HuEPO 的唾液 (BO EHR IN GER MANN HEIM) 中文名 :生血素