R9―FOXM1重组蛋白批量纯化及其抑瘤效应的研究.docVIP

R9―FOXM1重组蛋白批量纯化及其抑瘤效应的研究 　　摘 要：通过基因工程构建重组表达质粒pET15b-R9-FOXM1（1-234aa），转化大肠杆菌建立构建表达R9-FOXM1（1-234aa）的菌株.采用原核表达系统和His-tag亲和纯化手段，规模化制备纯化穿膜肽R9-FOXM1（1-234aa），获得的蛋白的纯度达到90%以上.用R9-FOXM1（1-234aa）穿膜肽处理不同的肿瘤细胞，通过MTT实验研究其细胞效应.结果显示：当R9-FOXM1（1-234aa）穿膜肽的浓度达到2 mM时，肿瘤细胞的死亡率为50%左右.实验表明穿膜肽R9-FOXM1（1-234aa）抑制不同肿瘤细胞的生长，有可能成为治疗肿瘤的潜在蛋白类药物. 　　关键词：多聚精氨酸；细胞穿膜肽；FOXM1；肿瘤治疗 　　中图分类号：Q784 文献标志码：A 　　Study of Scale Purification and Anti-tumor Efficacy ofR9-FOXM1（1-234aa） Recombinant Protein 　　TAN Yongjun，YU Jingwei，CHEN Yan，XIANG Qin，TAN Guixiang 　　（College of Biology， Hunan University， Changsha 410082，China） 　　Abstract：A recombinant protein expression vector pET15b-R9-FOXM1（1-234aa） was constructed and transformed to E. coli in order to generate a strain expressing R9-FOXM1（1-234aa）. The recombinant protein R9-FOXM1 （1-234aa） （R9-FOXM1（1-234aa）） was isolated at a large scale through His-tag affinity chromatography. The purity of the purified protein reached 90%. Moreover， MTT assay was used to test the effect of R9-FOXM1（1-234aa） on cells， and the test results showed that R9-FOXM1（1-234aa） caused the cell death of different types of cancer cells with a half lethal dose around 2 mm。 The results also demonstrated that R9-FOXM1（1-234aa） suppressed the proliferation of cancer cells and may be considered as a potential angent for anti-cancer in the future. 　　Key words：arginine-rich； cell-penetrating peptides； FOXM1； tumor therapy 　　Forkhead Box（Fox）基因广泛分布于从酵母到人的各种真核生物，构成一个庞大的转录因子家族[1]，在哺乳动物中已拥有超过40个以上的成员，分别参与调节细胞分化、增殖、代谢及细胞凋亡等生理过程[2].该家族的成员FOXM1，首先被发现是一个调控细胞周期和细胞增殖的蛋白[3].在细胞增殖过程中，FOXM1表达水平增高，并参与调节细胞周期相关的多个基因转录，从而控制细胞的DNA复制与有丝分裂过程[4-6]，还与DNA损伤修复有关[7-8].通过小鼠肝脏再生模型的研究发现，当从肝细胞中特异性敲除FOXM1基因之后，肝脏再生过程中DNA的复制降低了80%，而有丝分裂被完全抑制[5].在FOXM1被敲除的肝细胞中，细胞核内累积了大量细胞周期蛋白激酶的抑制蛋白p21Cip1和p27Kip1，从而大大降低了DNA的复制水平[5-6，9].同时，FOXM1还上调激活DNA复制所必须的Cdc25A 磷酸酶的表达[5].另一方面，FOXM1的缺失抑制了有丝分裂过程：因为FOXM1控制着许多与有丝分裂相关的基因转录，其中包括cyclin B1，Cdc25B，polo-like kinase 1（PLK1），aurora B kinase，Survivin，着丝粒蛋白A（CENPA）和CENPB基因[5-6，10-11].此外，不