流式配色及分析.ppt

选择BD Fixable Viability Stain Reagents（FVS染料）： 荧光补偿： 所谓“补偿”就是除去某一荧光素误入到其它荧光通道中的发射光信号。通过调节仪器完成这一步骤。往往我们通过检测带有单一荧光素的样本来减除误入其他荧光通道的信号。既单阳管。 三、单阳管：带有单一荧光抗体的样本管 用来排除荧光补偿 **注意，实验用到几种荧光，就要制备几种单阳管** 完整的流式实验方案 完整的流式实验方案包括： 空白对照管：去除自发荧光 同型对照管：去除非特异性荧光 单阳补偿管：去除荧光泄漏 实验样本管：检测样本 阴性对照与阳性对照 通过设置阴性对照和阳性对照更好的界定实验组的样本表达情况； 流式上机时的仪器条件设置 阈值设定 光电倍增管电压设定 补偿调节 门与设门 阈值设定 流式细胞分析的对象主要是细胞和微球，但实际上细胞碎片，颗粒性杂质也会被检测到。通过设定阈值可以减少后者的干扰； 每个通道阈值都可以设定。通常选择FSC通道进行阈值的设定，特定情况下会同时/或设定其他通道的阈值； 通常使用空白对照调整阈值； 电压设定 每一个流式通道都有自己特定的光电倍增管，其电压独立调控，在初次上机时一定都要调节到位，例如行fitc/pe双染，需调节fsc，ssc，fitc，pe4个通道的各自电压； 通常使用空白对照进行设定 电压偏低 电压合适 电压偏高 在行多色