柿叶黄酮类化合物乙醇提取工艺的研究.docVIP

柿叶黄酮类化合物乙醇提取工艺的研究 第23卷第3期 1999年9月 南昌大学(理科版) Jouma!ofNanchangUniversity(NaturalScience) V0】.23No.3 Sept.1999 柿叶黄酮类化合物乙醇提取工艺的研究* 石锦芹黄绍华胡欣恺徐建鸣 (南昌大学食品科学与工程系南昌330047) 摘要采用正交设计,以浸提温度,乙醇浓度和固液比为考察因素,对柿叶总黄酮的乙醇提取工 艺进行了研究.结果表明,用15倍柿叶重的50%乙醇水溶液,在75℃下浸提3h为最佳条件. 关键词柿叶,黄酮类化合物,正交设计 分类号0629.9;Q946.839 柿(DiospyroskakiL,f,)为双子叶柿树科柿树属中常见的栽培植物.柿叶中含有芦丁,黄 酮甙,Vc,p一胡萝卜素,生物态碘,必需氨基酸等多种营养物质和生理活性物质.国内外研究 表明,以柿叶为原料制取的柿叶制剂,柿叶茶,柿叶提取物及柿叶黄酮甙具有清热解毒,清血利 尿,抑菌,止血,降血脂,降低胆固醇,抑制癌瘤生长等多方面的生理功能).为了有效利用 柿叶所含的黄酮类物质,本文应用正交设计法对其乙醇提取工艺进行了研究. 1材料与方法 1.1材料和仪器 柿叶:江西于都大盒柿柿叶,自然干燥后粉碎过40目筛. 芦丁:生化试剂,上海试剂二厂. 乙醇,AI(NO3)2,NaNO2,NaOH均为分析纯试剂. 仪器:电子恒温水浴锅,722型分光光度计. 1.2正交设计 以乙醇为提取剂,选择乙醇浓度,提取温度和固液比为考察因素,以测得的柿叶样品中总 黄酮含量为考察指标,选用正交表L9(3)对柿叶总黄酮提取工艺进行研究.正交设计实验按 排见表1和表2. 表1正交设计因子和水平表 1.3芦丁标准液配制及标准曲线绘制 1.3.1标准液配制 收稿日期:1999—05—28 *南昌大学校基金课题 第一作者:女,I969年生,博士,讲师 第3期石锦芹等:柿叶黄酮类化合物乙醇提取工艺的研究 将芦丁于120℃下干燥至恒重,准确称取10.4mg芦丁标准品,用60%乙醇溶解,定容至 50mL,得浓度为0.208mg/mL的芦丁标准液. 1.3.2标准曲线绘制 准确吸取芦丁标准液0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL于25mL容量瓶中,加入5%NaNO2 溶液1mL,摇匀,放置6min后加入10%AI(NO3)3溶液10mL,摇匀,放置6min后加入4% NaOH溶液10mL,摇匀,用60%乙醇定容,15min后于510nm处测定吸光度A,得芦丁量Y (mg)与吸光度A间的回归方程为: Y=一0.0086+2.7490A(r=0.9996) 1.4柿叶总黄酮提取及含量测定 1.4.1柿叶总黄酮提取 称取10g(精确到0.001g)柿叶粉,按表2的要求加入一定量提取剂,在一定温度下回流 提取3h(未发表的前期研究结果表明,浸提时间在2～4h之间,对柿叶甲醇粗提物的得率的 影响在a=0.05水平上不显着,本文选择提取时间为3h),冷却后减压抽滤,滤渣在相同条件 下二次提取,合并抽滤液,先常压后减压蒸镏,回收溶剂至近干,用原提取剂定容于100mL容 量瓶中,作为待测液. 表2正交试验设计及结果表 1.4.2柿叶总黄酮含量测定 取1.4.1中定容之待测液5mL,放入50mL容量瓶中,用原提取剂定容,从中取1mL于 25mL容量瓶中,以下操作同1.3.2中标准陷线绘制,测定其在510nm处的吸光度A.柿叶 总黄酮含量可按下列公式计算: Y××_ 100×10—3 总黄酮含量(%)=—————一×100 ? 266?南昌大学(理科版)1999篮 式中:Y为从回归方程求得的芦丁量(mg) 和—100为稀释倍数 1叶 硼为柿叶重(g) 2结果与讨论 2.1柿叶总黄酮乙醇浸提条件的确定 表2的极差分析表明,3种考察因素对总黄酮含量的影响大小顺序为Bgt;Agt;C,随着提取. 温度从45℃升高为75℃,及乙醇浓度从90%降为50%,浸提出的总黄酮含量平均值分别从 5.27%增加为6.49%和从4.88%增加为6.38%,增幅分别为23%和31%,提取剂用量对总黄 酮含量的影响相对较小,提取物极值间增幅为15%.3种因素的最佳组合为A3B】c2,即用15 倍柿叶重的50%乙醇溶液,在75℃条件下回流提取3h,可得最佳提取效果. 2.2方差分析与多重比较 2.2.1F检验 对表2结果所作的方差分析(表3)表明,本实验中选用的3个考察因素对柿叶乙醇浸提 出的总黄酮含量的影响都达到了极显着水平. 表3柿叶总黄酮乙醇提取方差分析 2.2.2因素效应的差异显着性检验 以总黄酮含量作为比较标准,采用Dun— cans新复极差法检验3个因素各水平间的差 异显着性.查表得DF=11时不同P下的 SSR值并计算LSR值(S:0