试验四细菌纯种分离培养和接种技术.PDF

实验四 细菌纯种分离、培养和接种技术 一、目的要求 （1）掌握从环境中分离培养细菌、从而获得细菌培养 的技能。 （2）掌握几种接种操作技术。 二、主要仪器与材料 （1）无菌培养皿（直径90mm）9套，无菌移液管1mL2 支、10mL1支。 （2）培养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤悬液或湖 水1瓶，无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 （3）接种环、酒精灯（或煤气灯）、恒温箱。 三、细菌纯种分离 1.稀释平板倾注分离法 (1)取样：用无菌锥形瓶到现场取一定量的活性污泥或 土壤悬液或湖水，迅速带回实验室。 （2）稀释水样：将1瓶90mL和5管9mL的无菌水排 列好，按0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001及0.000001 依次编号。在无菌操作条件下，用10mL的无菌移液管 吸取10mL水样（或其他样品10g）置于第一瓶90mL 无菌水（内含玻璃珠）中，用移液管吹洗3次，用手 摇10分钟，将颗粒状样品打散。即为0.1浓度的菌液 。用1mL无菌移液管吸取1mL0.1浓度的菌液于9mL 3 0.01 无菌水中，用移液管吹洗 次，摇匀即为 浓度菌 液。同样方法，依次稀释到0.000001。 （3)平板的制作：取9套无菌培养皿编号，0.0001、 0.00001.0.000001各3个。 取1支1mL无菌移液管从浓度最小的0.000001 菌液开始，以0.000001、0.00001、0.0001为顺序分别吸取 0.5mL菌液于相应编号的培养皿内（注意每次吸取前，用移 液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀）。 加热融化培养基，当培养基冷置45摄氏度左右时，右手拿 装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指，无名指 和小指拖住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将 盖皿掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上顺时针和 逆时针来 回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即 37 24~48h 成平板，倒置于 摄氏度箱内培养 ，然后观察结果 。 2·平板划线分离法 1 50 （）平板的制作：将融化并冷却至 摄氏度的牛肉 膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养基皿内，使凝固成平板。 2 （）操作：用接种环挑取一环活性污泥 （或土壤悬液 等），左手拿培养皿，中环、无名指和小指托住皿底，拇指 和食指夹住皿盖，将培养皿稍倾斜，左手拇指和食指皿盖掀 半开，右手将接种环伸入培养基内，在平板上轻轻划线（ 切勿划破培养基），划线的方式可取实验图 中任何一种。划线完毕后盖好皿盖，倒置，30 摄氏度培养24~48h后观察结果 。3·几种接种操作技术 （1）接种工具：常用的接种用具有接种环、接种针、 接种钩、玻璃刮刀等。接种环和接种针等总长约25cm, 环、针、钩的长约4.5cm,可用白金、电炉丝等制成， 上述材料白金丝为最理想，其优点是：在火焰上灼烧 红得快，不易氧化且无毒，但价格昂贵，一般用电炉 丝。接种环的柄为金属的，其后端套上绝热材料套。 柄也可用玻璃棒制作。 （2）接种环境：微生物的分离培养、接种等操作需在 经紫外线灯灭菌的无菌操作室、无菌操作箱或生物超 净台等环境下进行。教学实验由于人多，无菌室小， 无法一次容纳所有实验者。所以，在一般实验室内进 行时要特别注意无菌操作。也可分组分批进行。 (3）几种接种技术： 1 斜面接种技术：这是将长在斜面培养基（或平板培 养基）上的微生物接到