肝癌细胞系中SP及CD133细胞的特性分析-中国细胞生物学学报.PDF

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(3): 244−251 研究论文 肝癌细胞系中SP 及CD133+ 细胞的特性分析 1 1 2 1 1　 1* 陈　侃　田雪君 　陈兴华 　贾晓渊 　钱　程 李恭楚 1 2 ( 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所, 杭州 310018; 江西省兴国县中医院, 兴国 342400) 摘要　　近年的研究表明体外培养的肝癌细胞系中存在着少量具有肝癌干细胞功能的细胞群。 有研究指出肝癌干细胞存在于侧群细胞 (side population, SP) 中, 另有研究则发现CD133+ 细胞是肝 癌干细胞的特征。本研究以三种肝癌细胞系(Hep3B、Huh-7 和 PLC/PRF/5)为对象, 利用流式细胞 术对其中的SP 细胞与CD133+ 细胞进行了分析, 并进一步检测了它们的增殖能力、表型及耐药性 等特性。结果显示, 肝癌细胞系中存在不同比例的SP 细胞和CD133+ 细胞, 且大部分SP 细胞呈 CD133 阳性表达。表型特征分析显示SP 细胞表达CK7 和CK19, 不表达AFP, 而CD133+ 细胞则表 达AFP 和CK19, 却不表达CK7。SP 与CD133+ 细胞都具有较强的增殖能力。另外, 相比于其它细 胞, SP 细胞具有最强的化疗药物抗性。结果表明, 肝癌细胞系中SP 细胞与CD133+ 细胞整体特征 有一定的区别, 提示了它们不同的分化途径。 关键词　　肝癌干细胞; SP 细胞; CD133; 肿瘤耐药 近年来的研究证实在一些肿瘤的发生、发展 标记的细胞, 并证实了它们具有白血病干细胞特性。 过程中, 干细胞发挥了重要的作用[1,2] [1] [4] , Reya 等 的研 随即, Singh 等 的研究发现从脑肿瘤中分离出的 究表明, 癌症可以看作是由于干细胞的自我更新能力 CD133+细胞群可分化为普通肿瘤细胞, 这使得探索 失调而导致的疾病, 而癌症的难治与否也与残存的干 细胞表面的分子标记成为肿瘤干细胞研究的新策略。 细胞有关, 从而提出了肿瘤干细胞(cancer stem cell, 另有研究表明, 在部分肝癌细胞系中也存在着少 CSC)这一概念。目前部分肿瘤干细胞已经被陆续 量具备肿瘤干细胞特性的细胞。Chiba’s 等[11]指出肝 分离和鉴别出来[3~6], 针对这些肿瘤干细胞进行的细 癌细胞系中的SP 细胞是肿瘤干细胞, 而Suetsugu 等[12] 胞学特性研究也正在展开。1996 年Goodell 等[7]报 却认为CD133+ 细胞才是肝癌的起始细胞。我们以 道, 经荧光染料Hoechst33342 标记的小鼠骨髓细胞 肝癌细胞系Hep3B 、Huh-7 和PLC/PRF/5 为研究对 用流式细胞仪407 nm 的紫外光源激发后, 大部分细 象, 对肝癌SP 细胞与CD133+ 细胞的特性及两者之 胞可同时发出两种不同的荧光(Hoechst Red和Hoechst 间的关系进行了研究。 Blue), 此外还存在着一小群Hoechst33342 低染的细 胞, 它们被命名为SP (side population) 细胞, 以区别 1 材料与方法 于主群细胞(main population, MP) 。后来的一些研 1.1 实验材料 究[8,9]表明在肿瘤细胞中也存在着SP 细胞, 它们带有 三种肝癌细胞系(Hep3B、Huh-7 和PLC/PRF/5) 多药耐药基因ABCG2 和ABCG3 , 后者使得SP 细胞 均由本所保存, 所有细胞均在5% CO2, 37℃(培养箱 具有可将外来的染料、