大鼠脊髓星形胶质细胞原代培养及腺病毒感染细胞——何久香。.pptVIP

威斯腾生物技术中心 大鼠脊髓星形胶质细胞原代培养及腺病毒感染细胞 （一）大鼠脊髓星形胶质细胞的原代培养 （二）腺病毒感染细胞 （一）大鼠脊髓星形胶质细胞的原代培养 1、实验前期准备 2、脊髓星形胶质细胞的分离 3、脊髓星形胶质细胞的培养 实验前期准备： 实验器械的高压灭菌 新生鼠的购买 培养瓶的包被 （细胞培养前1-2 h，培养瓶用0.1％多聚赖氨酸包被，置5％C02培养箱中，使用前用DMEM/F12培养基冲洗干净，吸尽所有多余的DMEM/F12培养基后备用于种板） 脊髓星形胶质细胞的分离 1、取新生乳鼠6只，75％乙醇皮肤消毒。无菌条件下剪刀断头，打开脊椎后取出脊髓组织并置于盛有DMEM/F12培养基的培养皿中反复冲洗，尽可能洗掉可能附着的表面血细胞。 2、使用眼科镊细致的剥离皮层表面蛛网膜，并取出脊髓，在该过程中可适当撕开软脊膜组织一并去掉脊髓组织深面的血管，随后使用冰预冷DMEM/F12反复冲洗。 3．在玻璃培养皿中用眼科剪将脊髓组织剪碎致直径0.3 mm左右小块，在剪碎过程中避免挤压脊髓组织，加入无菌3 ml 0.25％胰酶，置37℃细胞培养箱中消化30 min至浑浊状。 4．加入2-3 ml含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化，静置3 min后先用吸管吸去多余液体，再用吸管轻轻地吹打3次，收集