分子生物学张海红8章.ppt

本章要点 概念：半保留复制、半不连续复制、前导链、后随链、冈崎片段、复制子、复制叉、 解旋酶、引物酶、拓扑异构酶、 DNA聚合酶、端粒酶、端粒。 DNA复制过程中涉及的酶或蛋白质有哪些？各自有何功能？ 原核生物与真核生物DNA聚合酶结构及功能的异同？ 原核、真核DNA复制起始的异同点？ E.Coli 基因组复制的过程？ 端粒如何复制？端粒与衰老的关系如何？ 端粒酶组成及功能的是什么？ * * were interested in trying to devise a way to prove or disprove Watson and Cricks model of semi-conservative replication. * Meselson and Stahl tested the conservative, semi-conservative, and dispersive models of DNA. Their experiments supported the semiconservative model in which the two parental strand of DNA are templates for new, complementary strands and each replicated DNA molecule consists of one old strand and one new strand. 先将大肠杆菌细胞培养在用15NH4Cl作为唯一氮源的培养液里养很长时间（14代），使得细胞内所有的氮原子都以15N的形式存在（包括DNA分子里的氮原子）。这时再加入大大过量的14NH4Cl和各种14N的核苷酸分子，细菌从此开始摄入14N，因此所有既存的“老”DNA分子部分都应该是15N标记的， 而新生的DNA则应该是未标记的。接下来他们让细胞们继续高高兴兴地生长，而自己则在不同时间提取出DNA分子,利用CsCl密度梯度离心分离，最后得到下图 * 平衡密度梯度离心法。用超速离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。利用这种现象，测定核酸或蛋白质等的浮游密度，或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。自1958年米西尔逊（M．Meselson），斯塔尔（F．W．Stahl），维诺格拉德（J．Vinograd）成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA以来，该法取得许多成果。为得到必要的浓度梯度，多采用浓氯化铯溶液，所以有时也使用氯化铯密度梯度离心法命名这个名称，还可采用氯化铷、溴化铯等溶液。 * * Two key substrates must be present for DNA replication First, new synthesis requires the four deoxynucleoside triphosphates- dGTP. dCTP. dATP, and dTTP The second important substrate for DNA synthesis is a particular arrangement of ssDNA and dsDNA called a primer: template junction Only the primer portion of the primer: template junction is a substrate for DNA synthesis since only the primer is chemically modified during DNA synthesis. The template only provides the information necessary to pick which nucleotides are added. Nevertheless, both a primer and a template are essential for all DNA synthesis. * Recall that the two strands of the double helix have an antiparallel orientation. This arrangement means that the template strand for DNA synthesis has the opposite orientation of the g