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山西绵核桃无融合生殖特性的研究 　　摘要：山西绵核桃是我国核桃重要的栽培类型，以山西绵核桃为试材研究了其无融合生殖特性。套袋隔离结果表明，4个供试核桃单系均具有一定的无融合生殖能力，平均无融合生殖率为20.4％，最高达67.4％；方差分析结果显示不同地区来源单系间无融合生殖能力的差异达极显著水平，说明山西绵核桃群体中存在专性无融合生殖类型。山西绵核桃无融合生殖胚由卵细胞发育而来，属孤雌生殖类型。具无融合生殖特性的山西绵核桃后代叶片过氧化物酶同工酶酶谱一致性高于自然授粉后代。讨论了培育具无融合生殖特性的核桃新品种的可能性。 　　关键词：山西绵核桃；无融合生殖：套袋隔离；胚胎学；同工酶 　　中图分类号：S664.1　文献标识码：A　文章编号：1009-9980(2010)02-221-06 　　 　　山西省是我国北方主要的核桃(Juglans regiaL.)产区之一，在几乎遍布全省的两大核桃林带中，商品核桃产量的80％以上还是来自于实生繁殖的绵核桃品种群。由于实生繁殖造成的单株间性状分化普遍，这就形成了核桃优系选择的物质基础。人们很早就发现核桃具有无融合生殖特性，无融合生殖后代基因不发生分离，其基因组成与母本完全相同，虽然经过有性生殖过程但母本的优良性状不发生分离；或在授粉不良情况下仍可正常结实，保持一定产量。因而具有无融合生殖特性的核桃品种在苗木繁殖及稳定核桃产量方面具有重要意义。我们在前人研究核桃无融合生殖现象的基础上，从套袋隔离、细胞学、胚胎学、同工酶等方面对山西绵核桃的无融合生殖现象进行了比较系统的研究，重点探讨了无融合生殖核桃后代的特点，旨在对核桃无融合生殖现象有一个较深入的认识并为核桃优良品种的选育提供理论指导。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1　材料 　　套袋隔离材料为山西省核桃主产区分布的绵核桃成龄大树，树龄40～50a生，调查其来源为山西绵核桃(品种群)的嫁接苗，本文称之为不同的单系。立地条件为黄土丘陵区(孝义)、土石山区(古县、左权)及平原区(太谷)，2006年田间套袋隔离试验由于4月11日的大雪冻害而无结果。试验地位于山西晋中市(北纬37°25′，东经112°25′)，地势较平坦，海拔800m，年均温为9.8℃，年降雨量为456mm，无霜期120～176d，土壤为沙壤土，灌溉条件良好，管理水平一般。同工酶材料和实生苗观察来源于播种当年及2a生无融合生殖和自然授粉的左权绵核桃实生苗，播种于园艺学院园艺站。室内试验于2003年3月―2006年11月在山西农业大学园艺学院果树学重点实验室进行。 　　 　　1．2　方法 　　1．2．1　去雄套袋隔离　于4月份核桃雌花露出但未开放时对不同地区的4个供试单系，每单系定点选5株树，在树冠外围四周选发育正常的结果枝1～2个挂牌，每单系选3～5个雌花进行套袋。套袋时先摘除雌花附近的雄花序，保证羊皮纸袋内无雄花。同时随机选择20～30朵雌花不套袋作为对照，挂牌标记。10～15d后去除纸袋，去袋后1周分别调查套袋和不套袋雌花的坐果率。用去雄套袋的雌花数与自然授粉坐果数的比值表示无融合生殖率，并以此表示无融合生殖能力。试验重复3a，试验所得数据用SAS软件进行统计分析。 　　1．2．2　无融合生殖核桃胚胎学观察　从2003年3月25日―5月10日，每天上午10:00～11:00，采左权绵核桃雌花(芽)5个，固定保存方法同雄花序。采用常规石蜡切片，切片厚8～10μm，铁矾苏木精染色，OlympusBX50F-3型显微镜观察并照相。2004年重复此试验。 　　1．2．3　无融合生殖幼苗过氧化物酶同工酶的研究2004、2005年春季将前一年采集到的左权绵核桃无融合生殖果实和自然授粉果实获得的种子播种于实验田，作好标记，常规管理，7月中旬采集叶片做过氧化物酶同工酶的研究。试验时每单株取小叶2～3片，用湿纱布包裹，冰壶带回实验室，0℃研磨匀浆，提取液为预冷的0.05mol?L-1磷酸缓冲液(pH7.1)+5％(V/V)巯基乙醇，冷冻离心机0℃离心15min，离心力10000g。采用PowerPacTMBasic Basic型稳压稳流电泳仪(美国Bio-Rad)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离胶为7.5％(pH8.9)，浓缩胶为2.5％(pH6.7)，电极缓冲液为tris-甘氨酸缓冲液(pH8.3)。采用稳压电泳0℃条件下进行。电泳完毕，剥胶，冲洗，用改良联苯胺法染色，数码相机拍照记录。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2．1　核桃去雄套袋隔离试验结果 　　从表1可以看出，供试核桃各单系都具有一定的无融合生殖能力。4个单系无融合生殖率最低为0，最高达67.4％。3a的调查资料表明，年度间无融合生殖能力的差异最大，年度间差异大的原因或许是气候因