P-糖蛋白线粒体转位与线粒体DNA缺失肿瘤细胞多药耐药产生的关系.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(1): 35−40 P- 糖蛋白线粒体转位与线粒体DNA 缺失肿瘤细胞 多药耐药产生的关系 凌贤龙 　何玉琦　周　源　文　蕾* (第三军医大学新桥医院消化科, 重庆400037) 0 摘要　　线粒体DNA缺失细胞(ρ细胞)拮抗化疗药物诱导的凋亡, 但其确切机制尚不明确。本 研究探讨P-gp线粒体转位与人肝癌细胞(SK-Hep1) mtDNA 缺失细胞(ρ0SK-Hep1)多药耐药产生的关 系。以SK-Hep1、ρ0SK-Hep1和转线粒体细胞SK-Hep1Cyb 为研究对象, CCK-8 方法检测细胞对药物 敏感性; Annexin V/PI 双染法及DAPI 染色法检测细胞凋亡; Western blot检测P-gp 表达; 激光共聚焦 显微镜结合免疫荧光检测P-gp 细胞内分布。结果显示, SK-Hep1、ρ0SK-Hep1 和 SK-Hep1Cyb 细胞 对多柔比星(DOX)的IC50 分别为0.62±0.02 μg/ml 、4.93±0.17 μg/ml 和0.57±0.02 μg/ml。SK-Hep1、 0 0 ρSK-Hep1和SK-Hep1Cyb 细胞凋亡率分别为11.25%±1.36%、4.75%±0.98% 和14.50%±1.57%, ρSK- Hep1 对细胞凋亡有明显抗性。Western blot 检测发现ρ0 细胞内P-gp、Bax 、Bcl-2 表达增加, Bcl-2/ Bax 比值增加。免疫荧光共定位显示, ρ0 0 细胞线粒体内P-gp 表达增加。结果表明, ρ 细胞对化疗药 物诱导的凋亡有明显抵抗, 这种现象可能与ρ0 0 细胞P-gp、Bax 、Bcl-2 表达增加有关。ρ 细胞P-gp 线粒体转位可发挥外排泵作用将药物排出线粒体, 改变化疗药物的亚细胞分布, 减少细胞内药物浓 度, 使细胞产生多药耐药。 关键词　　P- 糖蛋白; 多药耐药; 线粒体DNA; 肿瘤 肿瘤细胞多药耐药(multidrug resistance, MDR) 胞ρ0SK-Hep1 以及转线粒体胞质体细胞SK-Hep1Cyb 是造成肿瘤化疗失败的重要原因。MDR 的发生主 为模型, 通过比较P- 糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)线 要涉及肿瘤细胞外膜上两类经典的转运蛋白[1]: 一类 粒体内外分布的差异, 探讨P-gp线粒体转位在mtDNA 是ATP 结合盒(ATP binding cassette, ABC)转运蛋白 缺失细胞多药耐药产生中的作用。 超家族, 具有能量依赖的跨膜药物外输泵功能, 可以 将细胞内底物包括多种抗肿瘤药物泵出肿瘤细胞, 如 1 材料与方法 P-gp/ABCB1 、MRP1/ABCC1 和 BCRP/ABCG2 等; 另 1.1 材料及细胞培养 一类溶质运载蛋白家族(solute carrier transporter su- 1.1.1 细胞株 人肝癌 SK-Hep1细胞株购自中国 perfamily)可调控细胞内抗肿瘤药物的吸收。两类转 科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学 运蛋白的过度表达可介导肿瘤细胞耐药。 研究所。 线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)缺失可 1.1.2 主要试剂 DMEM高糖培养基和胎牛血清 诱导肿瘤细胞多药耐药表型的产生, 然而其机制仍不 购自Gibco-BRL 公司; 丙酮酸钠、MTT 购自Sigma 清楚。mtDNA 缺失细胞对顺铂