新台糖16号甘蔗组织培养技术的研究.docVIP

新台糖16号甘蔗组织培养技术的研究 　　摘要研究不同配方对新台糖16号甘蔗诱导出愈伤组织、愈伤组织分化成绿苗、绿苗增殖及绿苗促根的影响,以筛选出较佳的配方。结果表明:用MS+2,4-D 2.5mg/L对诱导愈伤组织效果较佳,MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L对分化绿苗及其增殖效果最好;选用1/2 MS+IBA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L,附加活性炭0.05%,对促根的效果最好。 　　关键词甘蔗;新台糖16号;组织培养;最佳培养基 　　中图分类号 S566.1 文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)21-0050-02 　　 　　福建省长泰县是甘蔗的主要产区,2009年全县共种植甘蔗面积2 000 hm2,其中新台糖16号甘蔗有1 466.67 hm2,占种植面积的73.3%。新台糖16号具有早熟性,成熟期蔗糖分高,不抽穗开花,高产潜力好,综合农艺性状、宿根性、适应性和抗逆性等较好,是一个工、农性状兼优的品种,深受糖厂和蔗农的喜爱。但是,由于新台糖16号已推广多年,品种种性退化的负面影响已开始显现,甘蔗黑穗病、甘蔗花叶病和甘蔗宿根矮化病也已经危害福建省蔗区的甘蔗生产。为了进一步对新台糖16号提纯复壮,本文对新台糖16号的组培快繁进行探索研究。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　在晴天傍晚,选取无病虫害、生长健壮的新台糖16号蔗茎梢部作为外植体,蔗茎梢段剥除2～3层外叶鞘,切取长10 cm左右的茎段,用75%酒精擦洗外部及两端切口,置超净工作台上,再用75%酒精擦洗1次供接种。 　　1.2试验设计 　　1.2.1愈伤组织诱导试验。在愈伤组织诱导阶段,选取MS作为基本培养基,分别添加0.5、1.5、2.5、3.5 mg/L的2,4-D,观察其对愈伤组织诱导的影响,从中选取最适合愈伤组织诱导的2,4-D的浓度。 　　1.2.2分化培养试验。在绿苗分化阶段,选用不同浓度的细胞分裂素,会对绿苗分化产生不同的影响。在参考前人研究的基础上,探索选用的细胞分裂素为BA和KT,试验设BA单用和BA、KT混用浓度组合,即:MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L、MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L、MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L、MS+BA 2.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,观察其对绿苗分化的影响[1]。在绿苗增殖的阶段,同样采用上述的4种浓度,观察绿苗长势及增殖效果。 　　1.2.3生根培养试验。在绿苗生根阶段,不同浓度生长素对生根有不同的效果。在参考前人的研究的基础上,探索用1/2 MS代替MS作为基本培养基,设计浓度分别为1/2 MS+IBA 1.0 mg/L、1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、1/2 MS+IBA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L、1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L。 　　1.3试验实施 　　将消毒好的材料在无菌条件下环剥外层2～3层叶鞘并切除两端切口,横切茎段,每段厚2 mm左右,接入诱导培养基。以MS为基本培养基,加入蔗糖3%、琼脂0.7%,pH值5.8,不同培养阶段各附加相应的生长素或细胞分裂素,按试验设计处理进行。培养室温度25～26 ℃,每日光照11 h,光照强度2 000lx[1]。 　　2结果与分析 　　2.1愈伤组织诱导 　　从表1可以看出,4种不同浓度的2,4-D对新台糖16号均有较好的诱导效果,诱导率都达到80%以上,且愈伤组织增殖迅速、色乳白、鲜润,尤其是2,4-D浓度为2.5 mg/L诱导效果最好,诱导率达到94.0%,是新台糖16号愈伤组织诱导比较理想的浓度。 　　2.2分化培养 　　2.2.1细胞分裂素含量对绿苗分化的影响。从表2可以看出,添加不同浓度的细胞分裂素其结果不一样,特别是处理 MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,分化率达到91.3%,而且分化的绿苗高且壮,因此选用MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L是绿苗分化阶段比较理想的组合浓度。 　　2.2.2细胞分裂素含量对绿苗增殖培养的影响。从表3可以看出,除了MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L的效果较差、苗小苗少,其他3种浓度效果较好,特别是MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L处理的效果最好,苗数多,苗较高较壮,长势最好,且增殖系数达4.30。可见,MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0