产气荚膜梭菌α毒素免疫组化检测方法的建立及初步应用-预防兽医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取 得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或 集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意 学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允 许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制 手段保存论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将 本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并向社会公众提供信 息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导 师 签 名： 日 期： 课题资助 本研究由山东农业大学博士后基金项目资助。 This research was supported by the project of Shan Dong Argricluture University Postdocteral Sustentation Fund. 符 号 说 明 缩写 英文全称 中文全称 μL microlitre 微升 mL milliliter 毫升 bp base pair 碱基对 d day 天 ddH2O distilled and deionized water 重蒸水 DAB diaminobenzidine 二氨基联苯胺 DMEM dulbecco’s modified eagle’s medium 达尔伯克改良伊格尔培养液 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP deoxyribonuleoside triphosphate 脱氧核糖核苷三磷酸 ELISA enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 EDTA ethylenediaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FTG thiolglycollate medium 液体硫乙醇酸盐培养基 HE hematoxylin-eosin staining 苏木素伊红 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 IHC immunohistochemistry 免疫组织化学 ICC immunochtochemistry 免疫细胞化学 KDa kilo dalton 千道尔顿 LD50 median lethal dose 半数致死量 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 pH potential of hydrogen 酸碱度 rpm revolutions per minute 转数/分钟 SDS sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamine gel electrophoresis 十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 sec,min,h second,minute,hour 秒钟,分钟,小时 目录 中文摘要 I 英文摘要 III 1 前言 1 1.1 产气荚膜梭菌的研究概述 1 1.1.1 产气荚膜梭菌简介 1 1.1.2 产气荚膜梭菌的致病机理 5 1.1.3 产气荚膜梭菌病的传统诊断方法 7 1.2 产气荚膜梭菌 α 毒素提取与检测方法的研究概述 8 1.2.1 α 毒素的提取纯化 8 1.2.2 产气荚膜梭菌 α 毒素生物活性检测 9 1.3 免疫组织化学检测方法的研究进展 10 1.4 研究目的及意义 11 2 材料和方法 12 2.1 材料 12 2.1.1 菌株及实验动物 12 2.1.2 兔场情况 13 2.1.3 主要试剂材料及溶液配制 13 2.1.4 主要试验仪器 15 2.2 A 型产气荚膜梭菌 α 毒素的制备 16 2.2.1 标准菌种的复苏 16 2.2.2 FTG 增菌培养 16 2.2.3 α 毒素的制备 16 2.3 A 型产气荚膜梭菌 α 毒素的检测 17 2.3.1 Enterotoxaemia ELISA 试剂盒检测 α 毒素 17 2.3.2 A 型产气荚膜梭菌 α 毒素上清 LD50 毒性测定 17 2.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS）检测粗提 α 毒素蛋白 18 2.4 人工感染家兔产气荚膜梭菌 α 毒素 19 2.4.1 腹腔注射 α 毒素感染家兔模型 19 2.4.2 肌肉注射 α 毒素感染家兔模型 20 2.5 组织切片的制备及病理组织学检