产氢产乙酸互营共培养体的选育及其应用基础研究-微生物学专业论文.docxVIP

哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 Classified Index：Q93 U.D.C: 579 Dissertation for a Master’s Degree in Science ISOLATION AND BASIC APPLICATION OF SYNTRPPUIC ACETOGENS COCULTURE Candidate： SUN Qian Supervisor： Prof. Li Jianzheng Academic Degree Applied for： Master of science Specialty： Microbiology Affiliation: School of Muni. Env. Eng. Date of Defence： June, 2009 Degree-conferring-institution： Harbin Institute of Technology - - I - 摘 要 传统观点认为，产甲烷作用是厌氧消化过程的限速步骤。然而，前期研究 发现，产氢产乙酸菌群的生态幅要比产甲烷菌更加狭窄，对环境的变化更加敏 感，其代谢强度直接决定了产甲烷菌群的增殖和代谢能力，因此提出了“产氢 产乙酸菌群的产氢产乙酸作用是厌氧消化的第一限速步骤”这一学术观点。产 氢产乙酸菌的分离纯化非常困难，其研究进展缓慢，目前获得的纯培养物只有 少数几个。种子资源的匮乏，极大限制了基于强化产氢产乙酸作用的高效厌氧 生物处理技术的研发。基于以上认识和研究现状，本论文开展了产氢产乙酸互 营共培养体的分离筛选工作，并以此为基础，对所筛选的共培养体进行了生理 生态特性研究，并进一步探索了以其强化厌氧生物处理系统效能的可行性。 论文利用基质选择作用，通过选择培养基的传代培养和代时控制以及培养 条件的优化，最终选育到 7 号和 8 号两个产氢产乙酸菌互营共培养体。在含有 丙酸钠和丁酸钠各 10 g/L 的培养基中，经过 30 d 的培养，7 号和 8 号互营共 培养体的乙酸产量分别达到 2485 mg/L 和 3362 mg/L，产氢率分别达到 549.06 mL/L-culture 和 456.57 mL/L-culture。 通过 PCR-DGGE 分子检测手段，分析了 7 号和 8 号两个互营共培养体的 种群结构。在 PCR-DGGE 图谱中，7 号培养物显示出 4 个条带，8 号则呈现出 5 个条带，而且两个共培养体中有重叠条带，说明这两个培养物均为微生物的 混合培养物。将扩增得到的所有 16SrDNA 序列测序，并构建了系统发育树， 发现两个共培养体中都包含有专性产氢产乙酸菌 Syntrophospora bryantiii 和专 性的互营产乙酸菌 Desulfotomaculum sp.，除此之外还有伴生菌，如能利用甲 酸盐和 H2/CO2 的 Uncultured bacterium 和 Sedimentibacter sp.等。 生态因子对 7 号和 8 号两个互营共培养体的生长和产氢产乙酸特性研究表 明，以丁酸作为碳源（10 g/L）、胰蛋白胨和酵母膏作为氮源时，7 号共培养体 在 35℃、初始 pH 7 的条件下，具有最佳的生长和产氢产乙酸能力；8 号共培 养体则在 45℃、初始 pH 7.5 时具有最大的生长和产氢产乙酸能力。 摇瓶发酵试验结果表明，7 号和 8 号两个互营共培养体是开发厌氧发酵系 统生物强化技术的良好种子资源。取自发酵制氢反应系统的污泥，在投加 7 号 共培养体后，其氢气产量和氢气产生速率分别可提高 1.15 倍和 1.24 倍；取自 厌氧废水处理系统的污泥，在投加 8 号共培养体后，其底物转化率和甲烷产生 速率可分别提高 1.35 倍和 1.76 倍。初步证明了以产氢产乙酸菌互营共培养体 - - II - 强化厌氧生物处理系统效能的可行性。 关键词 产氢产乙酸菌；互营；共培养体；PCR-DGGE ；生物强化 - - PAGE IV - Abstract Among the bacteria colony in the anaerobic digestion system, hydrogen- producing acetogens (HPA) connect acidogenic fermentation bacteria with methanogens in functional niche. But HPA is quite difficult to be isolated in purity and ampliative culture by reason of the accrete characteristic