激光共聚焦显微镜技术讲座课件.ppt

5． 细胞间通讯： 荧光光漂白恢复(fluorescence recovery after photobleading，FRAP)技术可用于检测细胞缝隙连接通讯。该方法的原理是一个细胞内的荧光分子被激光漂白或淬灭，失去发光能力。而临近未被漂白细胞中的荧光分子可通过缝隙连接扩散到已被漂白的细胞中，荧光可以逐渐恢复。由于光漂白过程是不可逆的，因此可通过观察已发生荧光漂白细胞其荧光恢复过程的变化量来判断细胞缝隙连接的通讯功能。 6． 细胞膜流动性 ： 荧光光漂白恢复(FRAP)技术。利用NBD-C6-HPC标记膜磷脂，然后用高强度的激光束照射活细胞膜表面的某一区域(1～2μm)，使该区域的荧光淬灭或漂白，再用较弱的激光束照射该区域。可检测到细胞膜上其他地方未被漂白的荧光探针流动到漂白区域时的荧光重新分布情况。荧光恢复的速率和程度可提供有关的信息。 7． 细胞亚微结构(细胞器探针） 共聚焦激光扫描显微镜可获得较高分辨率的细胞内线粒体、高尔基复合体、内质网、溶酶体等细胞器图像，同时还可动态观察活细胞状态下细胞器的形态学变化情况，此外还可通过光学切片即断层扫描技术进行三维重建，显示细胞器的空间关系及其变化。适用于线粒体的荧光探针较多，如Mitotracker、DA SPMI、DA SPEI、JC-1