细菌耐药性产生及检测方法.pptVIP

* * * C型β-内酰酶 C型β-内酰酶通常被称为头孢菌素酶1989首次发现，按Bush分类法属1群。第1代头孢菌素是C型β-内酰胺酶的良好底物，第2、3代头孢菌素一般对C型β-内酰胺酶不敏感。亚胺培南和氨曲南则表现出对C型β-内酰胺酶的抑制作用。主要包括CMY、FOX、MOX、LAT、ACT、ACC、MIR和DHA D型β-内酰胺酶 D型β-内酰胺酶Bush分类属2d群，它们对苯唑西林和氯唑西林的水解速度明显大于苄青霉素，因此，它们又被称为“苯唑西林酶”，其中OXA-48 在碳青霉烯类耐药中显示出了日趋重要的碳青霉烯酶的活性。 超广谱β-内酰胺酶 ESBLs是一大类基于TEM-1、TEM-2和 SHV-1型β内酰胺酶基础上经突变而成的多种β-内酰胺酶，水解青霉素、广谱青霉素、头孢菌素、单环类、第四代头孢菌素，但不能水解碳青霉烯类、头霉素类。除了对β内酰胺类抗生素耐药外，经常伴随对氨基糖苷类等其他抗生素的耐药性。 准确区分ESBLs和非ESBLs菌株，不仅可指导临床合理用药，以免延误病情和增加医疗费用，而且有利于对ESBL菌株的管理，控制其传播，防止爆发流行，对提高治疗效果和控制医院院内感染均有重要意义。 AmpC酶 G-杆菌产生的不被克拉维酸抑制的头孢菌素酶组成的一个酶家族,属于β-内酰胺酶分子分类中的C类。产AmpC酶的耐药菌几乎对所有的β-内酰胺类药物耐药,对第4代头孢菌素如头孢吡肟敏感,对碳青霉烯类如亚胺培南、美罗培南有高度的活性。 AmpC酶可分为质粒介导型和染色体介导型。质粒AmpC基因来源于几种肠杆菌科细菌染色体AmpC基因,其AmpC没有调控基因,呈持续高表达,且质粒编码常同时携带有其他的耐药基因,因而导致多重耐药,并且传播很快,主要在大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、沙门菌属和志贺菌属中出现。染色体介导的AmpC酶能水解第3代头孢菌素等β-内酰胺类抗生素,其高水平表达与调节基因突变有关 ,当AmpD基因突变产生有缺陷的AmpD蛋白时,可引起AmpC过度表达,使产酶量大增引起耐药,多见于阴沟肠杆菌。 氨基糖苷修饰酶 乙酰基转移化酶(AAC)、磷酸转化酶 (APH)和腺苷酸转化酶(ANT)。 人们一直认为耐药菌株产生的氨基糖苷类修饰酶是主要的耐药机制，但临床分离致病菌株16S rRNA甲基化酶的发现改变了人们的观点。此酶可由质粒介导进行垂直和或水平播散，使细菌对氨基糖苷类抗生素产生多药交叉耐药及高水平耐药，给临床医生治疗革兰氏阴性杆菌感染带来更加严峻的挑战。 抗生素作用的靶位点发生突变 细菌通过对特定位点的突变，改变了与抗菌药物结合位点的结构，或产生了新的不能与抗生素结合的替代物质，或产生了保护性的物质阻止了抗生素的结合而逃避抗生素的作用。 链霉素 结合部位是30S亚基上的SI2蛋白,若SI2蛋白的构型改变,使链霉素不能与其结合而产生耐药性； 红霉素 靶部位是50S亚基的L4或L12蛋白,当染色体上的ery基因突变,使L4或L12蛋白构型改变,便会出现对红霉素的耐药性； 利福平 作用点是RNA聚合酶的β基因,当其突变时,就产生了耐药性； 青霉素 靶部位是细胞膜上的青霉素结合蛋白(PBPs),PBPs具有酶活性,参与细胞壁的合成,是β-内酰胺类抗生素的作用靶位,细菌改变了PBPs的结构,可导致耐药性； 喹诺酮类药物 靶部位是DNA旋转酶,当基因突变引起酶结构的改变,阻止喹诺酮类药物进入靶位,可造成喹诺酮类所有药物的交叉耐药。 外膜通透性改变 一些具有高渗透性外膜、对抗菌药物原来敏感的细菌,可以通过降低外膜的渗透性而出现耐药性。如原来允许某种抗菌药物通过的孔蛋白通道由于细菌发生突变而使该孔蛋白通道关闭或消失，细菌就会对该抗菌药物产生很高的耐药性。 此种耐药机制往往对抗菌药物特异性较差，具有多重耐药性，铜绿假单胞菌的外膜对多种抗菌药物如β内酰胺类、酶抑制剂、四环素、氯霉素和喹诺酮类的通透性极低，而导致先天耐药。 主动外排作用 主动外排作用是微生物对药物产生耐药性的一个重要机制，源于20世纪80年代关于大肠埃希菌对四环素耐药机制的研究,它是由药物外输泵来完成的。 药物外输泵是一类位于细胞膜上的具有特殊结构的膜转运蛋白质，其作用机理为当细胞内的药物浓度聚集达到一定数值时，药物外输泵系统相关mRNA 的表达增加，结果使细胞膜上外输泵的数量增加,使细胞内的药物被泵出。外排系统广泛存在于G+ 菌、 G-菌、真菌及哺乳类细胞(如癌细胞)中,其与细菌外膜通透性改变在多重耐药中起重要作用, 愈来愈受到研究者重视。 细菌生物膜的作用 细菌生物膜(BF)是指细菌吸附于生物材料或机体腔道表面,分泌多糖蛋白复合物,并将自身包绕其中形成的膜样物质。 细菌在BF的保护下可逃避抗菌药物的杀伤作用和免疫细