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基因组学蛋白质学文献交流 1.研究相互作用蛋白质组学的意义？ 蛋白质之间的相互作用对于大多数细胞功能的发挥是必不可少的。基因转运，细胞周期调控，信号转导和调控等基本过程都有赖于蛋白质复合物正常功能的行使。蛋白质复合物组成的信号或串联混乱常导致细胞功能障碍，最终引起疾病。 相互作用蛋白质组学是指大范围地或在整体水平上研究蛋白质相互作用的一门新兴学科。它侧重于研究蛋白质间的相互作用，试图建立细胞整体以及疾病或信号通路特异性的蛋白质相互作用网络。主要有特殊药物反应的蛋白相互作用和依赖磷酸化或其他蛋白修饰的蛋白相互作用。 研究相互作用蛋白质组学已成为现代分子生物学研究的关键，研究复杂的蛋白质组成让我们了解到他们的分子功能，有助于我们进一步了解致病机制，研发药靶蛋白,更好地用药等。 蛋白质几乎很少能单独发挥其作用，多蛋白质复合物在生物功能行使中发挥着重要的作用.蛋白质组的研究不仅能为生命活动规律提供物质基础，也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。 通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析，我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”，它们可成为新药物设计的分子靶点，或者也会为疾病的早期诊断提供分子标志。 深入理解蛋白质之间的相互作用对于理解疾病的病理生理学及确定药物作用的靶点有重要作用。对未来基础医学，临床医学，药物开发都有不可估量的作用。蛋白质组学研究不仅是探索生命奥秘的必须工作，也能为人类健康事业带来巨大的利益，蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因时代的特征。 2.相互作用蛋白质组学的研究方法有哪些? 分析相互作用的蛋白质组学的方法主要是遗传方法和生物化学方法。 生物化学方法，通过直接与蛋白质作用来检测蛋白质复合物的组成，从而来探究蛋白之间的相互作用，如1免疫共沉淀作用2亲和提纯法33）串联亲和纯化方法等； 遗传方法是在重组相互作用的报道分子的基础上确定蛋白质间的相互作用。其中经典的膜酵母双杂交系统以成为个体蛋白质相互作用和全球蛋白质图谱分析中应用最广泛的方法。文献中主要介绍了以下的方法1）蛋白质片段互补分析（PCA)2）膜酵母双杂交（MYTH)系统3）共振能量转移(RET)系统4）基于荧光的哺乳动物的蛋白质相互作用组图谱（LUMIER）5）哺乳动物蛋白质-蛋白质相互作用陷阱（MAPPIT）及其改良技术6）噬菌体展示技术7）蛋白质微阵列技术 与传统蛋白质相互作用研究方法相比，相互作用蛋白质组学的优势在哪里？ 经典的酵母双杂交系统（Y2H）有其局限性：相互作用限制于细胞核内，并只能将酵母作为宿主系统。很难用于高通量模式。 1、蛋白质片段互补分析（PCA）：它可用于高通量和低通量模式，不仅在体内、体内，在任何类型的细胞内都具有可操作性，也允许自然条件下和适当的亚细胞结构内进行试验，其适用范围广，性质较稳定。2、膜酵母双杂交系统(MYTH):不需要在核内作用，并可用于高低通量从不同的组织鉴别相互作用的膜或膜相关蛋白不同功能、结构和亚细胞位置。3、共振能量转移系统（PET）：一种典型的、高效的在体无损成像技术，能动态地反映活细胞生理过程的时空变化以及细胞信号转导通路的时空传递特性，可以在活细胞正常生理条件下无损伤地研究蛋白质间相互作用；可以反应在生物体内实时的研究动态的相互作用过程。4、基于荧光的哺乳动物相互作用（LUMIER）：可应用于96孔板的自动检测，能扩大蛋白质间微弱的或短暂的作用，这种方法对于分析膜蛋白，表达量低的蛋白，或者比较大，多聚体的蛋白十分有效;5、哺乳动物蛋白质-蛋白质相互作用(MAPPIT）：可以在很多方面应用，可被用来筛选cDNA文库，可以用来鉴别小分子之间的相互作用，是药物开发和靶向分子分析的有利工具。6、噬菌体展示技术：能够将表达蛋白和编码基因完美地联系起来, 并具有高通量、高选择性的特点，是确定和优化多肽功能的有效的方法7、蛋白质微阵列技术：可同时对成千上万的蛋白质的活性、功能、相互作用进行分析，且使检测系统小型化，缩短了检测时间，提高了敏感性，使成本效益大大降低。 *介绍目前蛋白质组学研究中最常用的基本技术流程并简述其原理 蛋白质学研究中需要两条互补的实验工作流程— 基于凝胶的工作流程和基于液相色谱的工作流程，基于凝胶的工作流程是目前使用较为广泛的、发展最为成熟的工作流程，通过样品制备、双向电泳分离、图像获取、图像分析，到抠点、酶切、点靶和MALDI-TOF蛋白鉴定等一整套技术手段，获得蛋白质数据。而基于液相色谱的工作流程则可以对在双向电泳中难以分离鉴定的高相对分子质量、低相对分子质量、极酸性、极碱性和疏水性强的蛋白质进行有效的分离鉴定。 双向电泳原理：第一向进行等电聚焦，蛋白质沿 pH 梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离 基因工程 已分离出1株具有较高