常见的巢式PCR.ppt

分子遗传 巢式PCR 定义 原理 优缺点 步骤 应用 常见问题及解决方案 定义 nest-PCR，嵌套PCR 巢式PCR是一种变异的PCR，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的目的基因片段 目标的DNA模板蓝色的第一对引物结合 使用图中红色标记的第二套引物对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增 原理 特点 优点 缺点 步骤 第一步：原始模板，外侧引物扩增，不加染料，循环数为20～25 第二步：第一步产物，内侧引物扩增，加入染料，循环数为40～45 应用 常见问题及解决方案 扩增污染发生：主要集中在第二步扩增解决：在第一步完成后，离心产物，小心吸取第一步产物，并在另一封闭空间加样。 引物设计 外侧引物比内侧引物TM值低4℃以上 外侧引物与内侧引物相距大于6bp以上  谢谢