常见的线粒体疾病的分子诊断.ppt

检测已知DNA突变的方法： 等位基因特异性寡核苷酸杂交（ASO） 等位基因特异性扩增（ASA） 限制性片段长度多态性分析（PCR-RLFP） 连接酶链反应（LCR） 基因芯片技术 检测未知DNA突变的方法： 单链构象多态性（PCR-SSCP） 变性梯度凝胶电泳（DEEG） 异源双链分析（HA） DNA序列测序 变性高效液相色谱（DHPLC） 分子诊断方法 线粒体疾病中常见的突变 核基因突变（nuclear gene mutations） 氧化磷酸化系统由核基因编码的蛋白质, 例如: Surf1, SCO2, NDUFV1, NDUFS1,etc. 呼吸链缺陷: 重复、缺失 线粒体DNA点突变（mtDNA point mutations） LHON, MELAS, MERRF, NARP, etc. mtDNA缺失/重复（mtDNA Deletions/duplications） eg. KSS, Pearson synd, diabetes deafness 未知遗传（unknown inheritance） * 第二节 线粒体基因组与耳聋 与耳聋相关的mtDNA突变 耳聋相关的mtDNA突变的检测 * 第二节 线粒体基因组与耳聋 与耳聋相关的mtDNA突变 耳聋相关的mtDNA突变的检测 PCR-RFLP技术 DHPLC技术 DNA测序技术 基因芯片技术 * 检测位点 引物序列(5′～3′) 退火温度(℃) 产物长度(bp) A1555G C1494T CGA TCA ACC TCA CCA CCT CT 58 802 TGG ACA ACC AGC TAT CAC CA A7445G ACG CCA AAA TCC ATT TCA CT 58 987 CGG GAA TTG CAT CTG TTT TT 第三节 线粒体与Leber遗传性视神经病变 与Leber遗传性视神经病变相关的mtDNA突变 Leber遗传性视神经病变相关的mtDNA突变常用检测技术 * Degeneration of retinal ganglion cells and their axons Inherited from maternal mitochondrial DNA Occurs during young adulthood Acute Phase: Painless, acute onset of central vision loss Loss of visual acuity/colour once symptoms appear in one eye, other eye affected weeks later Sub acute Phase atrophy of optic disc legally blind Asymptomatic until visual blurring develops Signs and Symptoms Maternal inheritance Mutation occurs in mitochondrial DNA (mtDNA) Only the egg contributes mtDNA to the embryo Genetics of LHON (1) G11778A: 50-60% LHON population (2) G3460A: 8-25% LHON population (3) T14484C: 10% LHON population Single Point Mutations3 major pathogenic mutations: G14459A T14484C presence of mixture of more than one type of organellar genome ie mtDNA Numerous cell divisions and thus lots of time is required for mutant alleles to be expressed in mitochondria Symptoms don’t appear until adulthood Also implicated as the reason for variability in severity of vision loss Heteroplasmy Vision damage from degeneration of optic nerve Maternally inherited through mtDNA 3 poi