医药-葡萄糖氧化酶活力测定(分光度法).docVIP

葡萄糖氧化酶活力测定（分光度法） 1.原理 （1）葡萄糖氧化酶的催化特性：葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位FAD（黄素腺嘌呤二核苷酸），作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。 C6H12O6+O2=氧化酶 C6H12O7+H2O2 在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后，测定其反应液的过氧化氢浓度即可算出葡萄糖氧化酶的活力。 （2）葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定pH值的缓冲溶液中和加热条件下能使靛蓝胭脂红发生褪色反应，并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比，据此测定出产生的过氧化氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶活力。 （3）首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应，在615nm波长处测定吸光度，建立标准曲线。然后，作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应，再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应随后测定其在615nm波长处测定吸光度，将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。 2药品 0.2mol/L葡萄糖溶液:称取3.96g一水葡萄糖定容于100.00mL冷藏3小时备用，2天内有效。 （2）1．0×10-3mol/L靛蓝胭脂红溶液：称取0.466g靛蓝胭脂红定容于1000mL。 0.2M醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=5.2)：称取16.16g三水醋酸钠及2.48g冰醋酸定容至1000mL （4）12mg/L过氧化氢标准溶液：准确