细胞原代培养实验.pptVIP

指导教师：费晓方 原代细胞培养实验---小鼠胚胎成纤维细胞培养 2014年6月 掌握无菌操作技术。 掌握组织细胞的消化与分散。 熟悉原代细胞培养的一般方法与步骤。 熟悉小鼠解剖操作技术。 实验目的和要求： 选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，胚胎成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 每组小鼠胚胎2-5个 动物的选择： 实验材料： 每组的超净台中有以下物品： 1. 50ml 配制好的RPMI1640（或DMEM）培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)(生理型磷酸盐缓冲液)1 瓶 2. 100ml灭菌烧杯2个； 3、50ml离心筒2个 4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个 4、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 5、细胞计数板1块； 6、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 7、酒精灯1台； 试验操作步骤： 1)胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠) a．采用认可的方案处死啮齿动物。 b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。 c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。 d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。 e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无