第十章氨基酸多肽和蛋白质类药品检验.ppt

第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 ②微量双缩脲法 有些样品中蛋白质含量很少，在常量双缩脲法测定范围之外，可选用微量法进行测定。 该法显色原理与双缩脲法相同，由于铜与蛋白质复合物的最大吸收峰260～280nm，但在此区域干扰因素及空白吸收都很大，而选在310～330nm测定干扰因素少一些，但仍比540nm测定灵敏10倍以上，因此可选用310nm进行比色测定，测定范围为0.1～1.0mg/mL；或用330nm测定，测定范围为0.2～2.0mg/mL。 干扰此测定的物质包括组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、Tris、乙醇胺、硫酸铵、尿素、去垢剂等。 第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 A、溶液的配制 标准蛋白质溶液 1.0或2.0mg/mL牛血清白蛋白溶液。 微量双缩脲试剂 称取173g枸橼酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）、100g无水碳酸钠一起溶于温水中，称取17.3g硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶于100mL水中，两者合并用水稀释至1000mL。 该试剂可长期保存，若出现黑色沉淀需重配。 第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 B、标准曲线及样品测定 取7支试管分别加入标准蛋白溶液0、0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mL，用水补足至1.5mL，加6％氢氧化钠溶液1.5mL混匀，再加0.15mL微量双缩脲试剂，混匀后在室温（20～25℃）保温15min